脑胶质瘤中Notch1对TGF-β通路的信号分子Smad2和Smad3的调节作用及机制的初步研究

摘要

目的： 1.研究人脑胶质瘤中Notch1与TGF-β通路是否存在联系。 2.探讨人脑胶质瘤中Notch1对TGF-β通路的Smad2和Smad3的作用机制。 方法： 1.通过慢病毒包装、转染、筛选，分别获得高表达 NICD的 U251细胞株和Notch1 RNA干扰的U251细胞株，并通过Western Blotting进行鉴定。 2.Western blot法检测NICD高表达的U251细胞及Notch1基因RNA干扰的U251细胞中总的及核内Smad2、Smad3的表达。 3.细胞免疫荧光法检测NICD高表达的U251细胞及Notch1基因RNA干扰的U251细胞总的及核内P-Smad2、P-Smad3的表达情况。 4.EMSA检测核内P-Smad3与靶DNA的结合活性。 结果： 1.成功建立了高表达NICD和Notch1基因RNA干扰的U251细胞株。 2.Western blot检测表明NICD高表达的U251细胞中Smad2、Smad3的表达水平均高于高表达对照组U251细胞，而Notch1 RNA干扰的U251细胞中Smad2的表达水平高于干扰对照组U251细胞、Smad3的表达水平低于干扰对照组U251细胞。NICD高表达的U251细胞核内Smad2的表达水平与高表达空载对照组无差异，核内的Smad3的表达增高；Notch1 RNA干扰的U251细胞核内Smad2表达水平低于干扰对照组，核内的Smad3表达与干扰对照组无差异。 3.免疫荧光染色结果显示NICD高表达的U251细胞总的及核内P-Smad2的表达水平均高于高表达空载对照组，Notch1 RNA干扰的 U251细胞总的及核内P-Smad2表达水平高于干扰对照组。NICD高表达的 U251细胞总的及核内的P-Smad3表达与高表达空载对照组比较无差异，在Notch1 RNA干扰的U251细胞总的P-Smad3的表达高于干扰对照组、核内的P-Smad3表达低于干扰对照组。 4.EMSA结果显示Notch1 RNA干扰的U251细胞核内P-Smad3与靶DNA的结合活性降低。 结论： 1.在脑胶质瘤中NICD的高表达能促进Smad3的表达，Notch1信号的下调能抑制Smad3的表达。 2.Notch1对Smad3调节的机制可能涉及到对其相应的磷酸化活化的调节及其与靶基因的结合活性。Notch1信号的下调促进Smad3的磷酸化但抑制P-Smad3在核内的表达及其与靶DNA的结合活性。

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前言

材料与方法

一、材料

二、方法

结果

一、NICD高表达和Notch1 RNA干扰的U251细胞株获得与鉴定

二、NICD高表达和Notch1基因RNA干扰对U251细胞中Smad2、3及磷酸化Smad2、3总的和核内表达的影响

三、EMSA检测NICD高表达和Notch1基因干扰的U251细胞核内磷酸化Smad3的活性水平

讨论

一、Notch1与神经胶质瘤的关系

二、Notch1对TGF-β信号通路的Smad2、3的影响

三、Notch1对Smad2、3的作用机制

结论

参考文献

综述:Notch1与TGF-β通路及其下游的Smad2、3在脑胶质瘤中的相互作用的研究进展

致谢