莫西沙星联合表柔比星对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞体外影响研究

摘要

目的：本课题意在通过研究莫西沙星及联合表柔比星对人三阴性乳腺癌株MDA-MB-231细胞的生长及侵袭能力的影响，并探讨莫西沙星可能的作用机制，为改善三阴性乳腺癌患者预后提供理论基础。
　　方法：
　　1、SRB法检测莫西沙星单药及联合表柔比星对 MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用。
　　2、免疫细胞化学法检测莫西沙星单药及联合表柔比星对MDA-MB-231细胞Ki67蛋白表达情况的影响。
　　3、Transwell侵袭实验对比莫西沙星单药及联合表柔比星对 MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响。
　　4、免疫细胞化学、Western Blot检测MMP2蛋白研究莫西沙星对该蛋白表达的影响。
　　5、Western Blot检测JAK-STAT3信号转导通路相关的Jak2、P-stat3、Bcl-2、Bcl-xl蛋白的表达来观察莫西沙星对该信号转导通路的影响。
　　结果：
　　1、SRB检测结果显示，莫西沙星、表柔比星均对体外培养的MDA-MB-231细胞有增殖抑制作用，24h、48h、72h三个时间点的 IC50分别为莫西沙星：156.843、65.055、55.572μmol/L；表柔比星：2.832、1.091、0.738μmol/L。且呈明显的浓度与时间依赖性（P＜0.01）。表柔比星2.5μmol/L与莫西沙星12.5μmol/L联合作用24h时体现出协同作用（q值＞1.15）。
　　2、免疫细胞化学法对 Ki67蛋白进行染色后检测各组光密度均值为分别为，阴性对照组：0.296±0.011；莫西沙星组：0.282±0.001；表柔比星：0.256±0.004；联合作用组：0.238±0.010；组间的光密度值存在显著差异（P＜0.05）。
　　3、Transwell侵袭实验各组穿膜细胞数分别为，阴性对照组：156.5±12.625；莫西沙星组：131.5±22.555；表柔比星：39.3±15.910；联合作用组：16.6±7.545；穿膜细胞数量的组间差别有显著意义（P＜0.05）。
　　4、莫西沙星降低了MDA-MB-231细胞MMP-2蛋白的表达，并与浓度呈负相关（P＜0.05）。
　　5、莫西沙星处理后Jak2、P-stat3、Bcl-2、Bcl-xl蛋白的表达均显著降低，并与浓度呈负相关（P＜0.05）。
　　结论：
　　1、莫西沙星、表柔比星均对体外培养的 MDA-MB-231细胞有增殖抑制作用，且呈明显的剂量与时间依赖性，二者联用时体现协同或相加效应。
　　2、莫西沙星通过下调MMP2蛋白的表达来降低MDA-MB-231细胞的侵袭能力，并与浓度正相关。与表柔比星联用时抑制作用更显著。
　　3、莫西沙星通过抑制JAK2-STAT3通路相关蛋白的表达，从而抑制MDA-MB-231细胞的增殖。

目录

声明

英文缩略词表（English acronyms table）

前言

第一部分 莫西沙星及联合表柔比星在体外对MAD-MB-231细胞的生长抑制及侵袭的影响

1材料

1.1 主要试剂及耗材

1.2 细胞株

1.3 主要仪器

1.4 有关溶液的配制

2方法

2.1细胞培养

2.2 测定莫西沙星、表柔比星单药及联合在体外对MAD-MB-231细胞生长的影响

2.3 免疫细胞化学法检测药物单用及联合作用下细胞Ki-67表达情况

2.4 Transwell侵袭实验检测药物单用及联合作用对细胞侵袭转移能力的影响

2.5 免疫细胞化学检测细胞MMP2表达及免疫印迹法检测莫西沙星对细胞MMP2表达的影响

2.6 数据处理

3 结果

3.1 测定莫西沙星、表柔比星单药及联合在体外对MAD-MB-231细胞生长的影响

3.2 免疫细胞化学法检测药物单用及联合作用下细胞Ki-67表达情况

3.3 Transwell侵袭实验检测药物单用及联合作用对细胞侵袭转移能力的影响

3.4 免疫细胞化学检测细胞MMP2表达及免疫印迹法检测莫西沙星对细胞MMP2表达的影响

4 讨论

5 小结

参考文献

第二部分 莫西沙星在体外对MAD-MB-231细胞影响的相关机制初步研究

1材料

1.1 主要试剂及耗材

1.2 主要仪器

2方法

2.1 免疫印迹法检测莫西沙星对JAK-STAT3信号转导通路相关蛋白表达的影响

2.2 数据处理

3 结果

3.1 免疫印迹法检测莫西沙星对JAK-STAT3信号转导通路相关蛋白表达的影响

4 讨论

参考文献

结论

综述:三阴性乳腺癌化疗及靶向治疗进展

致谢