基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测MRSAδ-毒素的应用

摘要

目的：
　　本研究探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）δ-毒素，评估其在MRSA快速分型中的意义。
　　方法:
　　1．收集83株临床分离的非重复MRSA菌株，按照美国疾病预防控制中心的社区获得性MRSA（CA-MRSA）定义分为HA-MRSA和CA-MRSA两组。
　　2．采用有葡萄球菌染色体盒mec（SCCmec）分型法和葡萄球菌A蛋白（spa）分型法对实验菌株进行分型，采用普通PCR法检测杀白细胞素（PVL）基因和δ-毒素（hld）基因。
　　3．采集实验菌株的MALDI-TOF MS蛋白指纹图谱，使用仪器配套软件分析所获得的图谱。
　　结果：
　　1．83株MRSA中HA-MRSA、CA-MRSA分别占47.0%、53.0%，HA-MRSA中来自于骨科、耳鼻喉科、呼吸内科、重症医学科分别为12.8%、10.3%、10.3%、10.3%，CA-MRSA中来自于皮肤科、耳鼻喉科、血管外科分别34.1%、31.8%、13.6%。
　　2．SCCmec分型中SCCmecⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳa型和未分型各占1.2%、3.6%、65.1%、28.9%、1.2%；39株HA-MRSA中SCCmecⅢ型占82.1%，44株CA-MRSA中SCCmecⅢ、Ⅳa型各占50.0%，HA-MRSA与CA-MRSA比较，SCCmecⅢ、Ⅳa型差异均有显著性（P=0.002、P=0.000)；spa分型中共检出15个型，t437、t062、t015分别占39.8%、21.7%、10.8%，其中HA-MRSA的主要spa分型t437、t062分别为28.2%、23.1%，CA-MRSA主要spa分型t437、t062分别50.0%、20.5%，HA-MRSA与CA-MRSA比较，t437型差异有显著性（P=0.043）。
　　3．83株MRSA的PVL总阳性率为24.3%，HA-MRSA和CA-MRSA分别10.3%、36.4%，两者差异有显著性（P=0.006），其中33株spa t437型MRSA的PVL阳性率54.5%。
　　4．使用MALDI-TOF MS技术检测MRSAδ-毒素，39株检出δ-毒素野生型，其信号峰为3005±5m/z，其中HA-MRSA19株，CA-MRSA20株，两者差异无显著性（P=0.766）；33株MRSA检出δ-毒素G10S变异体，其信号峰为3035±5m/z，其中HA-MRSA9株，CA-MRSA24株，两差异有显著性（P=0.003）。在spa分型中检出δ-毒素野生型，15（18.1%）株为t062型，8株为t015（9.6%）型，4株为t030（4.8%）株；检出δ-毒素G10S变异体，31（37.3%）株为t437型，2（2.4%）株t8660型；另外有11株-MRSA未检出δ-毒素，均为HA-MRSA。
　　5．δ-毒素G10S变异体作为spa t437型特异性标志物，灵敏度93.9%，特异性96.0%，ROC曲线下面积0.89（P=0.000）。
　　结论：
　　1．在本研究中spa t437型是CA-MRSA和HA-MRSA的主要克隆，该克隆PVL阳性率达54.5%，提示携带更高毒力的CA-MRSA克隆已经进入医院环境引起医院获得性相关感染。
　　2．使用MALDI-TOF MS技术可快速检测MRSAδ-毒素野生型和δ-毒素G10S变异体，信号峰分别3005±5m/z和3035±5m/z；而δ-毒素G10S变异体可作为spa t437型的特征性标志物，MALDI-TOF MS技术一次性获得MRSA蛋白指纹图谱，只需通过仪器配套软件查看是否检测出3035±5m/z这一独特的信号峰，便可快速辨认出目前本地区主要流行的CA-MRSA克隆。

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