丁香假单胞菌番茄变种DC3000 HrpA蛋白单链抗体的制备与分析

摘要

Hrp(hypersensitiveresponseandpathogenicity,Hrp)基因广泛存在于植物病原细菌中，参与Hrp极毛系统的组装，不仅可运输效应蛋白至植物细胞，导致HR或抗病性，还可运输致病性和毒性蛋白或抑制子活性物质，引起植物病害。hrp基因多串联成簇且相当保守，在诱导培养基或植物体内，基因簇中的hrpA基因编码细菌表面附属物Hrp极毛的结构蛋白HrpA。Hrp极毛在植物-病原细菌互作中扮演十分重要的角色。病原细菌能否使亲和性植物发病与其是否有Hrp极毛有直接的关系。 在对hrp基因进行深入研究的基础上，我们尝试设计新的化学药剂和抗体阻止HrpⅢ型分泌系统的组装或致病毒力蛋白因子的分泌运输，从而有效限制植物细菌病害的发展。本研究从特异性的以转化了丁香假单胞菌番茄变种菌株DC3000(Pseudomonassyringaepv.tomatoDC3000)hrpA基因的大肠杆菌(SGpQEHrpA/Ps)BL21(DE3)表达的工程蛋白HrpA/Ps为抗原制备而得的单克隆杂交瘤细胞系中提取RNA，经过RT-PCR获得抗体可变区基因，利用一柔性肽段(Linker)连接形成单链抗体(singlechainvariablefragment，scFv)，后应用基因工程方法，将scFv与噬菌粒载体pCANTAB-5E连接，转化大肠杆菌TGi，获得单链抗体噬菌体文库。此后，利用噬菌体展示技术对抗体库进行了5轮淘选(panning)，获得了HrpA特异性的单链抗体。 以单克隆抗体为来源的单链抗体，亲和力和特异性都较好，可以为进一步进行植物抗病基因工程和植物抗体研究提供基因来源。

目录

独创性声明及论文使用授权的说明

摘要

1前言

2文献综述

3材料与方法

4结果与分析

5小结与讨论

参考文献

附录

致谢