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第一章 前言
1.1 丝状真菌原生质体制备遗传转化研究进展
1.1.1 原生质体的制备的影响因素
1.1.2 影响原生质体再生的因素
1.1.3 丝状真菌的原生质体转化方法
1.1.4 丝状真菌遗传转化系统的选择标记
1.2 病原菌致病相关基因的研究
1.2.1 MAPK途径的研究
1.2.2 丝氨酸蛋白酶的研究
第二章 甘蔗梢腐病菌原生质体制备及遗传转化体系建立
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 实验方法
2.2 结果与分析
2.2.1 溶壁酶酶浓度对原生质体制备的影响
2.2.2 不同酶对原生质体裂解的影响
2.2.3 离心力及液体高度对原生质体活性的影响
2.2.4 不同高度的液体对沉淀的松紧度的影响
2.2.5 同样高度的液体、不同管径离心管对沉淀松紧度的影响
2.2.6 不同复苏时间对原生质体再生的影响
2.2.7 如何避免将原生质体离心于管壁上
2.2.8 不同减速档对于沉淀松紧度影响
2.2.9 不同稳渗剂对于原生质体沉淀的影响
2.2.10 甘蔗梢腐病菌的潮霉素最佳抑制浓度的筛选
2.2.11 离心机的平衡方法
2.3 结论与讨论
第三章 随机插入突变体的插入位点侧翼序列扩增的探索及发现
3.1 试验使用的菌株、质粒、试剂和培养基等材料
3.1.1 菌株
3.2 试剂
3.3 实验方案
3.3.1 镰刀菌基因组DNA的提取
3.3.2 DNA琼脂糖电泳
3.3.3 几种扩增侧翼的方法
3.3.4 测序
3.4 结果与分析
3.4.1 对扩增插入片段侧翼序列的一些探索
3.4.2 侧翼序列扩增结果
3.4.3 对扩增已知片段的侧翼序列的方法的探讨
3.5 结论与讨论
第四章 假定致病相关的基因的功能研究
4.1 材料与方法
4.1.1 原生质体制备与转化,DNA提取、PCR反应
4.1.2 Southern blot
4.1.3 FN28目的片段的扩增
4.1.4 基于同源重组的基因敲除原理
4.1.5 基因过表达突变体的获得
4.1.6 盐胁迫测定
4.1.7 致病性测定
4.2 结果与分析
4.2.1 目的片段的扩增
4.2.2 串珠镰孢MAPK信号级联相关基因功能分析
4.2.3 甘蔗梢腐病病原菌丝氨酸蛋白酶的研究
4.3 结论与讨论
参考文献:
致谢