三叶青有效成分测定方法的优化及栽培三叶青的品质评价

摘要

三叶青（Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg）为葡萄科崖爬藤属植物，近年来我省各地纷纷引种种植三叶青，对三叶青的开发利用研究正在各地开展，而闽北地区具有独特的自然条件，十分适合三叶青的生长。为了稳定和提高三叶青的有效成分含量，指导三叶青的种植，本研究以闽北地区野生和栽培的三叶青为材料，优化了三叶青的总黄酮和多糖的测定方法，并结合其他成分的测定结果，对闽北栽培三叶青的品质进行分析评价，为三叶青产业的持续发展提供理论依据。
　　从提取条件、显色条件、空白选择三个方面对紫外分光光度法测定三叶青中总黄酮的方法进行优化，获得的最优方法为：取三叶青粉末1.3 g，加40％乙醇50 mL，于90℃水浴回流90 min，放冷，滤过，精密吸取续滤液1 mL置于25 ml量瓶中，置于40℃水浴中，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，混匀，放置5 min，加5%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置15 min，加8%NaOH溶液10 mL，再加40%乙醇至刻度，摇匀，放置10 min。以芦丁为对照品，以续滤液为空白，在505 nm波长处测定吸光值。
　　从多糖提取、多糖纯化、多糖测定三个方面对紫外分光光度法测定三叶青中多糖的方法进行优化，获得的最优方法为：取三叶青粉末1.0 g，精密加入0.5 mol·L-1碳酸氢钠溶液35 mL，置70℃水浴中1.5 h，冷却，抽滤，收集滤液，再精密加入0.5 mol·L-1碳酸氢钠溶液35 mL，置70℃水浴中1.5 h，冷却，抽滤，合并两次滤液于100 mL量瓶中，加0.5 mol·L-1碳酸氢钠溶液至刻度，精密吸取8 mL，加入无水乙醇32 mL，摇匀，于4℃静置5 h，离心（7000 rpm）5分钟，弃去上清液，再加无水乙醇25 mL，离心5 min，弃去上清液，沉淀低温干燥，加水溶解并转移至25 mL量瓶中。精密吸取5 mL，加入6 mol·L-1的盐酸20 mL，回流30 min，冷却，用6 mol·L-1的NaOH调pH至中性，转移至100 mL量瓶中，加水至刻度，精密吸取50 mL，减压浓缩至10 mL，精密吸取3 mL，置25 mL的容量瓶中，加入DNS试液7 mL，于90℃水浴中加热5 min，迅速冷却，用水定容至刻度，摇匀，放置20 min，以葡萄糖为对照，在530 nm波长处测定吸光值。
　　以总黄酮、多糖、灰分与酸不溶性灰分、重金属、总糖、还原糖、低聚糖七个指标比较了栽培与野生三叶青的成分及含量差异。栽培三叶青的多糖和低聚糖的含量略高于野生三叶青，总黄酮的含量基本一致，总糖和还原糖的含量略低于野生三叶青，且栽培三叶青和野生三叶青的总黄酮、多糖、总糖、还原糖、低聚糖的含量差距在18.0%的范围内。栽培三叶青的总黄酮和总糖的变异系数略低于野生三叶青，多糖的变异系数低于野生三叶青5倍，还原糖和低聚糖的变异系数略高于野生三叶青。本文所测定的栽培与野生三叶青的各种成分含量差异较小，栽培三叶青的变异系数总体小于野生三叶青，因此以栽培代替野生作为三叶青的药用来源是可行的，这不仅有利于保护野生种质资源，使其不被破坏甚至灭绝，而且有利于三叶青的进一步开发与研究。

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1 引言

1.1 三叶青概况

1.1.1 三叶青资源分布

1.1.2 三叶青的生物学特征

1.1.3 三叶青的临床应用

1.2 三叶青成分研究现状

1.2.1 三叶青总黄酮研究现状

1.2.2 三叶青多糖研究现状

1.3 本研究目的和意义

2 材料与方法

2.1 样品采集

2.2 仪器、对照物与试剂

2.3 三叶青中总黄酮测定方法的优化

2.3.1 溶液的制备

2.3.2 提取条件的优化

2.3.3 显色条件优化

2.3.4 空白溶液的选择

2.3.5 优化方法的检验

2.3.6 三叶青总黄酮的测定方法

2.4 三叶青中多糖测定方法的优化

2.4.1 溶液及标准曲线的制备

2.4.2 多糖提取纯化方法的优化

2.4.3 多糖含量测定方法的优化

2.4.4 三叶青多糖的测定方法

2.5 三叶青其他成分的测定方法

2.5.1 三叶青中总灰分及酸不溶性灰分的测定方法

2.5.2 三叶青中重金属的测定方法

2.5.3 三叶青中总糖、还原糖、低聚糖的测定方法

3 结果与分析

3.1三叶青中总黄酮测定方法的优化

3.1.1 提取条件的优化

3.1.2 显色条件的优化

3.1.3 反应温度的优化

3.1.4 空白溶液的选择

3.1.5 优化方法的检验

3.1.6 三叶青的总黄酮含量测定

3.2 三叶青中多糖测定方法的优化

3.2.1 多糖提取纯化方法优化

3.2.2 多糖含量测定方法的优化

3.2.3 三叶青的多糖含量测定

3.3 三叶青的其他成分测定

3.3.1 三叶青的总灰分及酸不溶性灰分测定

3.3.2 三叶青的重金属测定

3.3.3 三叶青的总糖、还原糖、低聚糖含量测定

4 结论与讨论

4.1 结论

4.1.1 三叶青的总黄酮测定方法

4.1.2 三叶青的多糖测定方法

4.1.3 栽培三叶青的品质评价

4.2 讨论

4.2.1 三叶青中总黄酮测定的讨论

4.2.2 三叶青中多糖测定的讨论

4.2.3 三叶青品质评价的讨论

参考文献

致谢