HSP70在星形胶质细胞损伤后反应性增生中的作用

摘要

目的：探讨HSP70对星形胶质细胞反应性增生及BDNF表达的影响，并进一步明确HSP70在胶质瘢痕形成中的作用。 方法：从新生大鼠大脑皮层中分离培养并纯化星形胶质细胞，采用抗GFAP的免疫细胞化学染色方法来鉴定细胞纯度。用划痕损伤法制备星形胶质细胞体外损伤模型，并将细胞分为三组。正常组：正常培养的星形胶质细胞，不做损伤及其他任何处理；损伤对照组：细胞损伤后立即在细胞培养基中加入无菌PBS；损伤干预组：细胞损伤后立即在细胞培养基中加入HSP70抗体。分别对正常组以及损伤后30min，24h，4d，7d的损伤对照组和损伤干预组进行GFAP和BDNF免疫细胞化学染色，观察细胞增生情况，分析图象平均光密度值及细胞形态学参数。并在上述时间点分别提取各组细胞的总RNA，用RT-PCR方法检测不同时间点GFAPmRNA及BDNFmRNA的表达。 结果： (1)所培养的星形胶质细胞经鉴定，纯度达97.83％；(2)采用划痕损伤的方法建立的星形胶质细胞体外损伤模型与国内外其它星形胶质细胞损伤模型中细胞增生的时间和形态特点基本一致；(3)GFAP免疫细胞化学染色结果显示，损伤干预组与损伤对照组相比，Ast增生明显减少，平均细胞面积、平均细胞突起数目及突起长度均减小(P＜0.05)。BDNF免疫细胞化学染色结果显示，损伤干预组与损伤对照组相比，平均光密度值明显降低(P＜0.05)。(4)RT-PCR结果显示，与损伤对照组相比，损伤干预组GFAPmRNA及BDNFmRNA的表达明显降低(P＜0.05)。 结论：(1)成功培养出了纯度＞95％的星形胶质细胞；(2) 成功构建了星形胶质细胞体外划痕损伤模型；(3)HSP70在星形胶质细胞损伤后反应性增生的过程中发挥了重要作用；(4)用抗体封闭HSP70后，一定程度上控制了星形胶质细胞的反应性增生，有利于减少胶质瘢痕的形成； (5)HSP70在星形胶质细胞反应性增生过程中主要通过C端发挥作用；(6)星形胶质细胞反应性增生被控制后，胶质瘢痕减少的同时，BDNF的生成也减少。

目录

论文说明：英汉缩略语名词对照

声明

摘要

前言

第一部分大鼠星形胶质细胞的原代培养及体外损伤模型的建立

1材料与方法

2结果

3讨论

第二部分HSP70被抗体封闭后对星形胶质细胞损伤后反应性增生的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

结论

参考文献

附图

文献综述 几种分子在胶质瘢痕形成中作用的研究进展

致谢

研究生期间发表的论文