固相萃取高效液相色谱紫外检测法测定血清中结合型胆汁酸的方法研究与临床应用

摘要

目的： 1.建立一种同时测定血清中9种结合型胆汁酸的固相萃取高效液相色谱紫外检测法（SPE-HPLC-UV）。 2.用SPE-HPLC-UV法测定正常孕妇、轻度和重度妊娠肝内胆汁淤积症（ICP）患者母血和脐血中各结合胆汁酸的浓度，建立ICP的特征胆汁酸谱用于ICP的诊断和分度，初步探讨ICP患者母体-胎儿的胆汁酸平衡变化。 方法： 1.用Chromabond C18 ec固相萃取柱萃取血清样品。 2.色谱条件：色谱柱：Waters Nova C18色谱柱（3.9×150 mm，5μm）；柱温：25℃；流速：0.8 ml/min；流动相A：60μmol/L磷酸盐缓冲液（pH3.3），流动相B为纯甲醇（A：B=34：66，v/v）；检测波长197 nm；进样量20μl，检测时间20 min。 3.用SPE_HPLC-UV法测定16例正常孕妇、11例轻度和14例重度ICP患者母血及脐血结合型胆汁酸。 结果： 1.9种结合型胆汁酸在20分钟内分离完全，各胆汁酸在浓度为5～500μmol/L范围内线性良好，r为0.9993～0.9998，具有良好的相关性；最低检测限为1.25～3.13μmol/L；该方法日内变异系数在1.47％～5.95％之间，日间变异系数在1.61％～7.92％之间，平均回收率在83.11％～101.34％之间。 2.母血：与正常孕妇组的相比：轻度ICP组TCA、TCDCA、TDCA增高有统计学差异；重度ICP组TCA、GCA、GLCA、TCDCA和TDCA增高且有统计学差异。与轻度ICP组相比：重度ICP组TCA、GCA、GLCA、TDCA增高有统计学差异。 脐血：与正常孕妇组相比：重度ICP组TCA、GCA和TDCA增高且有统计学差异。与轻度ICP组相比：重度ICP组TCA、GCA、TDCA增高有统计学差异。轻度ICP组的胆汁酸谱与正常孕妇组相比无统计学差异。 结论： 1.本研究建立的血清胆汁酸的SPE-HPLC-UV分析法能实现母血与脐血中结合型胆汁酸的测定，该方法准确、灵敏、快速、特异，适用于实验室研究和临床常规检测。 2.本研究建立了轻度和重度ICP患者母血与脐血中的特征胆汁酸谱，该胆汁酸谱有助于ICP的诊断和分度。 3.本研究发现正常孕妇、轻度和重度ICP母血与脐血中胆汁酸水平成正相关，但正常孕妇脐血中总胆汁酸及TCA、GCA含量高于母血，而ICP患者母血中总胆汁酸及TCA含量却高于脐血。这些现象可能是由于胎盘对胆汁酸的转运机制发生改变使母体-胎儿的胆汁酸平衡发生了变化。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英汉缩略语名词对照

声明

前言

第一部分固相萃取高效液相色谱紫外检测法测定血清中9种结合型胆汁酸的方法研究

1.材料和方法

2.结果和讨论

3.结论

第二部分妊娠肝内胆汁淤积症母体与胎儿血清结合型胆汁酸测定及临床意义

1.方法与实验

2.结果

3.结论

4.讨论

全文总结

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文