K-ras突变刺激CDK8表达从而促进胰腺癌上皮细胞间质转化分子机制研究

摘要

目的：胰腺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，肿瘤的难治性与其早期转移密切相关。上皮来源恶性肿瘤转移的一项重要机制为肿瘤细胞的上皮细胞间质转化（EMT）发生，伴随着EMT能力增强肿瘤会显示出更高的迁移性和侵袭性。因此，通过研究胰腺癌细胞EMT潜在分子机制，可能为抑制胰腺癌早期转移从而提高胰腺癌患者的生存率提供潜在的策略。
　　本研究首先在胰腺癌与正常组织中检测K-ras的突变及CDK8的表达情况，并对它们两者之间的相关性进行分析；其次，通过在胰腺癌细胞中过表达或干扰突变K-ras，从而分析K-ras突变与CDK8表达之间的关系及其可能的分子机制；最后，将所有胰腺癌细胞系进行干扰或过表达突变K-ras或CDK8，然后分别检测转染前后胰腺癌细胞功能学和相关分子标记物的改变，并进一步探讨突变 K-ras或CDK8促进EMT可能的潜在分子机制。
　　方法：（1）采用免疫组化和DNA测序法对42例胰腺癌及18例正常胰腺组织中 CDK8的表达和 K-ras的突变情况进行检测，分析胰腺癌中 K-ras的突变和CDK8表达之间的关系。
　　（2）采用病毒转染外源性的干预突变K-ras的表达，运用共转染及WB技术进一步分析胰腺癌中突变的K-ras是通过何种分子机制对CDK8表达进行调控的。
　　（3）采用病毒转染外源性的干预突变K-ras或CDK8表达，通过WB，共转染，CCK8细胞增殖，细胞侵袭迁移，细胞凋亡，免疫荧光等实验方法，评估突变K-ras或CDK8表达的高低对胰腺癌细胞分子生物学及细胞生物学的影响及其分子机制。
　　结果：（1）CDK8在胰腺癌中为致癌基因，在其形成过程中起着重要作用，但 CDK8表达水平高低在不同胰腺癌样品中并不完全一致。其表达水平高低依赖于K-ras基因是否突变；其在K-ras突变的样品中表达要远高于K-ras为野生型的样品。
　　（2）在K-ras突变的细胞系中CDK8表达要远高于K-ras为野生型的细胞系，在K-ras基因突变的胰腺癌细胞中干扰该基因的表达，会伴随着CDK8表达下降，反之，在野生型K-ras基因的细胞中过表达突变的K-ras会导致CDK8表达增加。通过外源性基因片段转染和共转染实验，我们发现突变的K-ras刺激CDK8的表达可能是通过调节HIF-1α通路而实现的，而且在体外试验中无论是CDK8或突变的K-ras的过表达均可以促进细胞增殖并预防细胞凋亡。
　　（3）此外，无论是CDK8或突变的K-ras的高表达均可以促进胰腺癌细胞的侵袭和迁移，从而促进胰腺癌细胞的上皮细胞间质转化（EMT）。上述分子机制是CDK8或突变的K-ras通过激活Wnt/β-catenin信号通路，促进刺激上皮细胞间质转化重要介质SNAIL1和ZEB1的表达而促进EMT的。最后，无论是CDK8或突变的K-ras基因的干扰均可以导致胰腺癌细胞在的BALB/ c裸鼠中生长减缓，反之，伴随着CDK8或突变的K-ras的过表达则可以促进胰腺癌在BALB/ c裸鼠中的生长。
　　结论：在胰腺癌中，突变的K-ras可以促进CDK8的表达，而且CDK8可以部分通过调控Wnt/β-catenin信号通路而促进胰腺癌上皮细胞间质转化。

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英汉缩略语名词对照

中文摘要

英文摘要

前言

参考文献

第一部分 胰腺癌中K-ras突变及CDK8表达情况

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第二部分 K-ras突变及CDK8表达之间的关系及分子机制

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第三部分 K-ras突变及CDK8表达高低对胰腺癌细胞分子生物学及细胞生物学的影响及其分子机制

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

全文总结

不足之处与展望

文献综述: 胰腺癌相关分子机制研究进展

致谢

攻读学位期间的主要研究成果