RUNX3对BMP9诱导的间充质干细胞成骨分化的影响

摘要

目的：研究和确认RUNX3对BMP9诱导的间充质干细胞成骨分化的影响。
　　方法：BMP9腺病毒感染间充质干细胞，通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测内源性Runx3的基因水平，通过Western Blot检测内源性RUNX3蛋白的表达。构建过表达RUNX3(Ad-RUNX3)和干扰RUNX3（Ad-siRUNX3）的腺病毒，通过RT-PCR进行验证。利用过表达RUNX3(Ad-RUNX3)和干扰RUNX3腺病毒(Ad-siRUNX3)处理间充质干细胞，通过碱性磷酸（ALP）染色和活性定量测定，检测成骨早期指标ALP；用茜素红S染色，检测成骨晚期指标钙盐沉积。同时用流式细胞仪检测RUNX3对BMP9诱导的间充质干细胞增殖和周期的影响。利用RT-qPCR检测成骨相关转录因子Id1、Id2、Dlx5和Runx2的基因表达；利用Western Blot检测DLX5和RUNX2的蛋白表达；通过Western Blot检测RUNX3对经典的BMPs/Smad信号通路中Smad1/5/8和非经典的MAPK信号通路中p38和ERK1/2的变化。
　　结果：BMP9可以使MSCs中RUNX3基因和蛋白表达升高（p<0.05）；过表达和干扰RUNX3都可以增强BMP9诱导的早期成骨指标ALP活性，增加S期细胞的比例以及上调成骨相关转录因子Id1和Id2的基因表达（p<0.05）；过表达RUNX3可以增强BMP9诱导的晚期成骨指标钙盐沉积，而干扰RUNX3可以抑制BMP9诱导的晚期成骨指标钙盐沉积。过表达RUNX3促进BMP9诱导的成骨相关转录因子DLX5和RUNX2的基因和蛋白表达，干扰RUNX3抑制DLX5和RUNX2的基因和蛋白表达（p<0.05）。过表达RUNX3促进BMP9诱导的Smad1/5/8的磷酸化，干扰RUNX3抑制BMP9诱导的Smad1/5/8的磷酸化，对总的Smad1/5/8蛋白水平无影响。RUNX3不影响BMP9诱导的p38、ERK1/2的磷酸化水平。
　　结论：RUNX3在调控BMP9诱导间充质干细胞向成骨分化过程中发挥重要作用，而且主要是通过影响经典的BMPs/Smad信号通路来实现的。

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英汉缩略语名词对照

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英文摘要

前言

1材料和方法

1.1材料

1.2实验方法

2结果

2.1 BMP9可以上调间充质干细胞中内源性RUNX3的表达

2.2 构建Ad-siRUNX3腺病毒并对过表达RUNX3腺病毒（Ad-RUNX3）和干扰RUNX3腺病毒（Ad-siRUNX3）进行功能验证

2.3 RUNX3对BMP9诱导的早期成骨分化指标ALP的影响

2.4 RUNX3对BMP9诱导的晚期成骨指标钙盐沉积的影响

2.5流式细胞术（FCM）检测RUNX3对BMP9诱导的MSCs增殖和周期的影响

2.6 RUNX3对BMP9诱导的MSCs成骨相关转录因子的影响

2.7 RUNX3对BMP9相关信号通路的影响

3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述; RUNX在成软骨及成骨过程中的研究进展

致谢

攻读硕士期间发表的论文