三叉神经节卫星胶质细胞P2X7受体在偏头痛大鼠模型中作用的研究

摘要

目的：
　　通过大鼠腹腔注射硝酸甘油（GTN）建立急性偏头痛模型。造模成功后使用Western blot技术检测大鼠三叉神经节上P2X7受体和c-fos的表达变化；使用免疫荧光检测卫星胶质细胞上P2X7受体和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达情况。最后通过腹腔注射P2X7受体抑制剂亮蓝（ BBG）观察其对三叉神经脊束核 c-fos和降钙素基因相关肽（CGRP）表达的影响,来探究P2X7受体是否参与偏头痛的发病及其可能的机制。
　　材料和方法：
　　1. Sprague-Dawley大鼠10只，随机分为2组：腹腔注射生理盐水组（n＝5，2ml/Kg）和腹腔注射 GTN组（n＝5，10mg/Kg）。给药前使用Von Frey测痛仪测量各组大鼠后爪上的基础痛觉阈值，之后分别在给药第1、2和4小时时再次测量大鼠后爪上的痛觉阈值。使用免疫荧光观察大鼠三叉神经节P2X7受体和GFAP的表达。
　　2. Sprague-Dawley大鼠20只，随机分为4组：正常组（n＝5）和腹腔注射GTN1小时组（n＝5，10mg/Kg）、腹腔注射GTN2小时组（n＝5，10mg/Kg）和腹腔注射GTN4小时组（n＝5，10mg/Kg）。Westernblot技术检测大鼠三叉神经节上P2X7受体和c-fos的表达变化。
　　3.Sprague-Dawley大鼠20只，随机分为4组：腹腔注射生理盐水2小时组（n＝5，2ml/Kg）、腹腔注射GTN2小时组（n＝5，10mg/Kg）、腹腔注射GTN+生理盐水2小时组（n＝5，10mg/Kg，2ml/Kg）和腹腔注射GTN+BBG2小时组（n＝5，10mg/Kg）。使用Western blot技术检测大鼠三叉神经脊束核c-fos和CGRP的表达。
　　结果：
　　1.痛觉阈值：腹腔注射GTN后，大鼠后爪上的痛觉阈值开始下降，在第2小时下降最为明显，明显低于生理盐水组（p＜0.05）。
　　2.免疫荧光：三叉神经节上的P2X7受体和GFAP共表达。
　　3.Western blot：腹腔注射GTN后，大鼠卫星胶质细胞P2X7受体表达开始下降，在第2小时下降最为明显，明显低于正常组（p＜0.05）。而三叉神经节和三叉神经脊束核c-fos和CGRP的表达明显高于正常组（p＜0.05）。在使用P2X7受体抑制剂BBG后c-fos和CGRP增加的更加明显（p＜0.05）。
　　结论：
　　1.P2X7受体特异性表达在大鼠三叉神经节卫星胶质细胞上。
　　2.急性偏头痛大鼠模型三叉神经节P2X7受体表达降低，提示P2X7受体在偏头痛中可能有一定作用。
　　3.急性偏头痛大鼠腹腔注射 BBG后，三叉神经脊束核 c-fos和CGRP的表达进一步增高，表明卫星胶质细胞P2X7受体在偏头痛中可能具有保护作用。

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英文摘要

前言

1材料和方法

1.1材料

1.1.1实验动物

1.1.2实验仪器与设备

1.1.3主要试剂

1.1.4实验液体配方

1.2方法

1.2.1实验动物分组

1.2.2大鼠后爪痛觉阈值测定

1.2.3组织蛋白质的提取

1.2.4灌注固定与冰冻切片制备

1.2.5 western blot

1.2.6免疫荧光

1.3统计学分析

2结果

2.1大鼠的痛觉阈值测定

2.2大鼠三叉神经节卫星胶质细胞P2X7受体和GFAP共表达

2.3腹腔注射GTN后三叉神经节各个时间点P2X7受体和c-fos的表达

2.4腹腔注射BBG对三叉神经脊束核c-fos和CGRP的影响

3讨论

结论

参考文献

文献综述:偏头痛的发病机制

致谢

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