雷公藤甲素通过TGF-β信号通路抑制上皮-间充质转化(EMT)治疗百草枯诱发的肺纤维化

摘要

第一部分：雷公藤甲素对百草枯诱导的肺纤维化的治疗作用研究 目的：评价雷公藤甲素对常用肺纤维化模型-百草枯诱导的肺纤维化的治疗作用。 方法：本课题采用百草枯作为造模诱导剂，诱导建立了肺纤维化模型，并测定了药物对肺纤维化模型体重，肺系数及肺组织胶原含量的影响，并根据炎性细胞浸润，肺间质纤维化等程度等对肺组织切片进行评分，综合评价雷公藤甲素对肺纤维化的治疗效果，并利用免疫组化的方法研究了雷公藤甲素对EMT标志物的影响。 结果：雷公藤甲素可以显著改善肺纤维模型小鼠的活动状态，肺纤维化模型小鼠的肺系数、胶原含量百分比显著下降。给药雷公藤甲素后肺组织肺纤维化程度病理学评分也显著下降。此外对TGF-β1、TNF-α、IFN-γ等在肺纤维化过程中发挥重要作用的细胞因子也有调控作用。百草枯诱导的肺纤维化程度被显著改善。雷公藤甲素可以显著降低肺纤维化模型小鼠肺组织间充质标志物Vimentin及α-SMA的表达量，提高上皮标志物的表达量，抑制肺上皮细胞的EMT过程。 结论：雷公藤甲素对百草枯诱导的肺纤维化具有一定的治疗作用，并且可以抑制肺上皮细胞的EMT。 第二部分：雷公藤甲素治疗肺纤维化的药理机制研究 目的：阐明雷公藤甲素治疗肺纤维化的分子机制，研究其对肺上皮细胞EMT的影响；寻找其作用靶点及发挥作用的下游信号通路，并进行验证。 方法：本课题利用划痕实验，Transwell实验，免疫荧光等方法研究了雷公藤甲素对PQ诱导的肺上皮细胞EMT的影响；利用计算机模拟的方法预测了雷公藤甲素与可能的作用靶点TGF-β1的结合情况，并用Biacore的方法验证了二者的结合；进一步用免疫组化，western-blot等方法在细胞水平及动物水平上验证了雷公藤甲素可以抑制 TGF-β1诱导的EMT，证明了雷公藤甲素靶向TGF-β1发挥抗肺纤维化的作用。 结果：TPL可以显著抑制PQ诱导的肺上皮细胞的迁移和侵袭，抑制其诱导的EMT；TPL与肺纤维化诱导因子TGF-β1具有很好的结合活性；TPL可以抑制TGF-β1诱导的EMT过程，TPL通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路发挥治疗肺纤维化的作用。 结论：雷公藤甲素可以通过靶向TGF-β1/Smad信号通路抑制肺上皮细胞的EMT过程，从而发挥抗肺纤维化的作用。 第三部分：雷公藤甲素对博莱霉素（BLM）诱导的肺纤维化的治疗作用初探 目的：评价雷公藤甲素对经典的特发性肺纤维化模型-博来霉素诱导的肺纤维化小鼠模型的治疗作用。 方法：本课题采用作为博来霉素作为造模诱导剂，诱导建立了特发性肺纤维化模型，并测定了药物对肺纤维化模型体重，肺系数及肺组织胶原含量的影响，并根据炎性细胞浸润，肺间质纤维化等程度等对肺组织切片进行评分，综合评价雷公藤甲素对肺纤维化的治疗效果。 结果：雷公藤甲素可以显著改善肺纤维模型小鼠的活动状态，肺纤维化模型小鼠的肺系数、胶原含量百分比显著下降。给药雷公藤甲素后肺组织肺纤维化程度病理学评分也显著下降。博来霉素诱导的肺纤维化程度被显著改善。 结论：雷公藤甲素对博来霉素诱导的肺纤维化具有一定的治疗作用，显著改善肺组织纤维化程度。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

参考文献

第一部分 雷公藤甲素对百草枯诱导的肺纤维化的治疗作用研究

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

第二部分 雷公藤甲素治疗肺纤维化的药理机制研究

1材料与方法

2实验结果

3讨论

参考文献

第三部分 雷公藤甲素对博莱霉素（BLM）诱导的肺纤维化的治疗作用初探

1材料与方法

2实验结果

3讨论

参考文献

全文总结

文献综述：肺纤维化病理机制研究及动物模型

致谢

攻读博士学位期间研究成果及发表论文