狭叶松果菊组织培养、毛状根诱导及其松果菊苷和绿原酸积累的研究

摘要

本文对狭叶松果菊组织培养、毛状根诱导及其松果菊苷和绿原酸积累进行了研究。结果如下： 1．狭叶松果菊的组织培养和植株再生：以无菌苗叶片及叶柄为材料通过L 9(3<'4>)正交试验筛选出最佳的愈伤组织诱导培养基：MS+6BA0.5mg/L+NAA1.0mg/L；最佳的丛芽诱导培养基：MS+6BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L．再生芽经附加IBA0.5mg/L的1/2MS培养基生根后移栽成活获得再生植株。采用HPLC方法分析了狭叶松果菊组培苗各部位中次生代谢产物松果菊苷和绿原酸的含量，结果表明组培苗根中松果菊苷和绿原酸的含量高于地上部分，愈伤组织中含量最低，几乎检测不到松果菊苷的存在。 2．狭叶松果菊的毛状根诱导：利用发根农杆菌A4、R1000诱导得到狭叶松果菊毛状根，建立狭叶松果菊毛状根诱导体系。狭叶松果菊外植体被A4、R1000两种发根农杆菌感染后，20d后，外植体伤口处陆续分化生长出白色的毛状根。PCR实验结果表明，Ri质粒的T-DNA已整合在狭叶松果菊毛状根的基因组中。利用HPLC分别检测了A4-1、A4-2、R1000-1、R1000-24个单克隆毛状根培养系中松果菊苷和绿原酸的含量，结果表明不同株系次生代谢物含量差异较大．其中A4-2毛状根培养系中松果菊苷和绿原酸的含量分别达到0.16 mg/gDW和0.82mg/gDw，均超过了原植物的0.15 mg/gDw和0.68 mg/gDW。R1000-2毛状根培养系的绿原酸含量0.94mg/gDW，为原植物的1.4倍。 3．狭叶松果菊根悬浮培养体系的建立：以1/2MS为基本培养液，通过在培养液中添加不同的生长激素，试验结果表明添加了0.5mg/L的IBA根长势最好，优于添加NAA及2，4-D的培养液，后两者培养过程中愈伤化严重。通过在根悬浮培养液中添加不同浓度苯丙氨酸(0，5，10，15，20，25mg/L)的实验表明苯丙氨酸有促进组培苗根生长的作用，其中5mg/L苯丙氨酸促进生根效果最明显。经HPLC检测添加20mg/L的苯丙氨酸最有利于松果菊苷的积累。

目录

文摘

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第1章文献综述

1.1药用植物组织培养的研究进展

1.2植物次生代谢研究进展

1.3利用植物组织培养生产有用次生代谢产物研究进展

1.4松果菊属药用植物的研究状况

1.5课题的研究内容与思路

第2章狭叶松果菊的组织培养和植株再生

2.1仪器与试剂

2.2材料与方法

2.3结果及分析

2.4讨论

第3章狭叶松果菊毛状根诱导体系的建立

3.1仪器与试剂

3.2材料与方法

3.3结果与分析

3.4讨论

第4章狭叶松果菊组织培养物中松果菊苷及绿原酸积累的研究

4.1仪器与试剂

4.2实验方法

4.3实验结果

4.4讨论

第5章结论与展望

5.1主要结论

5.2后续研究工作展望

参考文献

附 录

致 谢

在读期间发表论文及参与课题