一氧化氮在P物质诱导BALB/c小鼠搔抓反应中的作用

摘要

[目的]
　　 1.通过皮内注射P物质(SP)建立BALB/c小鼠急性瘙痒模型。
　　 2.观察Spantide(NK1受体拮抗剂)、L-精氨酸(L-arg，NO供体)、L-NAME(总NOS抑制剂)、氨基胍(iNOS抑制剂)对SP诱导小鼠搔抓反应的影响，探讨一氧化氮(NO)在SP诱导的BALB/c小鼠搔抓反应中的作用。
　　 [方法]
　　 1.BALB/c小鼠急性瘙痒模型的建立：对照组、实验组分别在颈背部皮下、皮内注射生理盐水和不同剂量SP(20、40、80、160 nmol/site)50μl，注射后在无人条件下拍摄小鼠搔抓行为1 h，回放录像计数小鼠后爪对注射部位的搔抓次数。
　　 2.同时注射Spantide、L-arg或NOS抑制剂对SP诱导小鼠搔抓反应的影响：颈背部同时皮内注射SP(80 nmol/site)和生理盐水、Spantide(0.5 nmol/site)、L-arg(300 nmol/site)、L-NAME(100 nmol/site)、氨基胍(50 mg/kg)，注射总体积均为50μl。
　　 3.提前注射Spantide、L-arg或NOS抑制剂对SP诱导小鼠搔抓反应的影响：颈背部皮内注射生理盐水(模型组)、Spantide(0.5 nmol/site，Spantide组)、L-arg(300 nmol/site，L-arg1组)、L-NAME(100 nmol/site，L-NAME组)、氨基胍(50 nmol/site，氨基胍组)，10 min后皮内注射SP(80 nmol/site)；L-arg2组在颈背部皮内注射L-arg(300 nmol/site)后5 min，皮内注射SP(80 nmol/site)。第二次注射时旁开0.5cm，注射总体积均为40μl。
　　 4.注射部位皮肤中皮肤中NO含量及iNOS表达测定：颈背部皮内注射Spantide(0.5 nmol/site)、L-arg(300 nmol/site)、L-NAME(100 nmol/site)、氨基胍(50 nmol/site)，10 min后皮内注射SP(80 nmol/site)。注射SP后5 min处死小鼠，剪下注射处皮肤，分别用硝酸还原酶法检测组织中NO含量、S-P法行免疫组织化学染色，染色结果用图像分析软件进行处理。
　　 [结果]
　　 1.皮下注射生理盐水和不同剂量SP引起的小鼠搔抓次数差异无统计学意义(P>0.05)。除生理盐水和20 nmol/site SP组之外，皮内注射40～160 nmol/site SP可使小鼠出现剂量依赖性搔抓反应(P<0.01-0.05)；这种搔抓反应在注射SP后5～10 min达到高峰，30～40 min后基本消退。
　　 2.同时皮内注射Spantide、L-NAME对SP诱导的搔抓反应无明显影响(P>0.05)，而提前10 min注射Spantide、L-NAME可明显减少小鼠搔抓次数(P<0.01)；同时或提前10 min、5 min注射L-arg对SP诱导的小鼠搔抓均无明显影响(P>0.05)；同时注射大剂量氨基胍(10 mg/kg)可增强SP诱导的小鼠搔抓反应(P<0.01)，而提前10 min注射小剂量氨基胍(50 nmol/site)可明显减少小鼠搔抓次数(P<0.05)。
　　 3.Spantide组、L-NAME组、氨基胍组小鼠皮肤中iNOS表达和NO含量明显低于SP组(P<0.01-0.05)，但其在L-arg组中无明显升高(P>0.05)。
　　 [结论]
　　 1.皮内注射40～160 nmol/site SP可使BALB/c小鼠出现剂量依赖性搔抓反应，而皮下注射SP不能引起明显的搔抓反应。
　　 2.SP可通过激活皮肤中NK1受体来上调iNOS表达和促进NO合成，从而引起小鼠搔抓。
　　 3.L-arg对SP诱导的BALB/c小鼠搔抓反应无明显影响。
　　 4.NOS抑制剂(L-NAME、氨基胍)可通过下调iNOS表达来减少皮肤中NO含量，从而抑制SP诱导的小鼠搔抓反应。