嗜酸性粒细胞和急性白血病细胞之间相互作用的研究

摘要

[目的]
　　 通过细胞体外实验，研究嗜酸性粒细胞和白血病细胞之间的相互作用。
　　 [方法]
　　 1.使用白血病细胞培养液上清，培养嗜酸性粒细胞，通过CCK-8分析和DAPI染色嗜酸性粒细胞，荧光显微镜观察其细胞核变化的方法，探讨白血病细胞培养上清和嗜酸性粒细胞存活的关系。
　　 2.用嗜酸性粒细胞作效应细胞、白血病细胞为靶细胞，进行白血病细胞增殖抑制实验。用CFSE标记、流式细胞仪(FCM)检测，观察嗜酸性粒细胞对白血病细胞是否有直接的增殖抑制作用。
　　 3.用淋巴细胞作效应细胞、白血病细胞为靶细胞，并加入嗜酸性粒细胞混合培养，在15:1的效靶比下进行白血病细胞增殖抑制实验；并与不加嗜酸性粒细胞组比较。用CFSE标记、FCM检测，观察嗜酸性粒细胞对淋巴细胞抑制白血病细胞增殖作用是否有影响。
　　 [结果]
　　 1.嗜酸性粒细胞单独培养120h，使用新鲜培养液培养的嗜酸性粒细胞(对照组)存活率仅为19.7％，而用Jurket、M2a、M3a及HL-60细胞的培养液上清培养的(实验组)存活率分别为68.4％、74.1％、76.0％和86.7％。实验组的嗜酸性粒细胞继续培养至216h，收集细胞，涂片，DAPI染色，其细胞体积相对新鲜分离的变小，形态规则，嗜酸性颗粒及核染色质比较完整；对照组培养120h，其细胞体积也变小，形态规则，颗粒清晰，但核染色质已经破碎。
　　 2.嗜酸性粒细胞和白血病细胞混合培养72h，在效靶比100:1的情况下，白血病细胞依然形成克隆性增长。CFSE标记的HL-60细胞和嗜酸性粒细胞混合培养72h，经流式细胞仪检测。结果显示，对照组和实验组HL-60细胞的增殖指数分别为18.66±0.56、18.13±1.12两者之间的差异没有统计学意义(P>0.05)。
　　 3.CFSE标记的HL-60细胞和嗜酸性粒细胞及淋巴细胞和混合培养72h，经流式细胞仪检测。结果显示，空白对照组、实验对照组及实验组HL-60细胞的增殖指数分别为18.6±0.56、8.43±0.55、6.23±0.58。三者之间两两比较，它们之间的差异均有统计学意义(P<0.005)。
　　 [结论]
　　 1.白血病细胞培养液上清中可能存在某些细胞因子维持嗜酸性粒细胞的存活。
　　 2.嗜酸性粒细胞在体外对白血病细胞无增殖抑制作用。
　　 3.嗜酸性粒细胞可以增强淋巴细胞对白血病细胞的体外增殖抑制效应；