黄芩、黄柏提取液与抗-MRSA IgY体外抑菌活性的比较研究

摘要

[目的]耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是医院感染的重要致病细菌之一；黄芩抗菌范围广，对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、肺炎球菌等常见病菌均有抑菌作用，临床上可用于治疗湿温、暑温、胸闷、恶心呕吐、泻痢、黄疸、咳嗽、高热烦渴、血热吐衄、痈肿疮毒、胎动不安等病；黄柏对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、甲型链球菌、乙型链球菌、变形杆菌均有明显的抑菌作用，临床主要应用于湿热泻痢、热淋盗汗、疮疡肿毒等；抗-MRSA IgY对MRSA有明显抑制作用，它将对MRSA感染的防治起到积极作用。本研究拟通过体外抗菌活性的观察，初步探讨黄芩、黄柏的提取物，以及这两个中药组成的不同配伍液对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌作用，同时也对抗-MRSA免疫球蛋白抗菌活性进行观察，与中药进行比较，为临床防治耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染提供思路。
　　 [方法]黄芩原液的制备采用二次煮沸法，取黄芩加入蒸馏水浸泡20min，强火加热煮沸，文火煎煮30min，搅拌，过滤；药渣再加入蒸馏水按上法煎熬、过滤；两次药液合并浓缩，调pH值至7.8～8.0，并置离心管中，以4000r/min离心10min；121℃高压蒸汽灭菌20min后备用；黄柏原液同样的方法制备；IgY的提取采用改良水稀释法，打蛋收集蛋黄液，以6倍双蒸水稀释蛋黄液，调节pH值为5.5，置4℃冰箱放置过夜，10000转/分离心20min，收集上清液，加入硫酸铵，使硫酸铵的饱和度达45％，置4℃冰箱静置8 h，以10000转/分离心20min，弃去上清液，沉淀物按每mL卵黄液加5mL PBS缓冲液(0.01 mol/L，pH7.0)溶解，将溶解液装入透析袋对蒸馏水透析除NH4+，最后1次改用对PBS缓冲液透析，透析液用G6漏斗除菌过滤，即得IgY提取液。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌体抑菌作用的检测采用琼脂稀释法，用M-H琼脂对中药进行定量抑菌实验，用倍比稀释的药液制成含药平板，将耐甲氧西林金黄色葡萄球菌新鲜培养物制成菌液(浓度相当于0.5麦氏比浊管)，接种于各含药平板上，以不加药液的琼脂平板为对照，于35℃培养18～24 h，观察最低抑菌浓度(MIC)，并统计出抑制50％试验菌株的最低药物浓度(MIC50)和抑制90％试验菌株的最低药物浓度(MIC90)以及累计抑菌百分率。
　　 [结果]用二次煮沸法提取的黄芩、黄柏具有有效成分易于煎出，吸收快，奏效迅速，作用强特点，因其操作简单，不需特殊仪器设备，因此具有易于推广的优点；用改良水稀释法提取的卵黄中IgY具有特异性强，纯度高，效价高，耐热，耐酸的特点，具有易于规模提取的优点。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌体抑菌作用：黄芩提取液的MIC50为0.75mg/ml，MIC90为6.20mg/ml；黄柏MIC501.35mg/ml，MIC90为10.60mg/ml；黄芩：黄柏(1:1)MIC50为0.18mg/ml，MIC90为1.40mg/ml；黄芩：黄柏(1:2)MIC50为0.34mg/ml，MIC90为2.74mg/ml；黄芩：黄柏(2:1)MIC50为0.09mg/ml，MIC90为0.74mg/ml；抗-MRSA IgY的MIC50为1:8192，MIC90为1:2048。
　　 [结论]黄芩、黄柏提取液对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌均有较好的抑菌作用，其中黄芩比黄柏为好，两者有显著性差异；黄芩、黄柏配伍液中，以2:1的配伍抑菌效果最好；抗-MRSA IgY对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌有较好的抑菌效果。