基于固定化酶检测接口的毛细管电泳化学发光联用技术在药物分析中的应用

摘要

随着生命科学、临床药学的发展，药物分析在分析科学中越来越重要。复杂生物样品中痕量生物大分子和药物的分析一直是困扰分析工作者的难题。毛细管电泳具有高效、快速、消耗量低等优点，已成为近年来分析化学最活跃的研究方向之一。从技术水平来说，毛细管电泳已经发展为不同的分离模式，从而满足不同性质样品在管内的最佳分离。毛细管的样品分离量在纳升级，非常适用于微量生物样品的分析，但同时也对检测的灵敏度提出了更高的要求。虽然激光诱导荧光，质谱等检测技术满足了毛细管电泳检测的要求，但是昂贵的仪器价格和复杂的检测程序限制了它们的应用范围。将具有独特高催化效率的酶反应应用到毛细管电泳中放大检测信号提高灵敏度已受到关注。化学发光检测是一种在暗背景下实现对光信号的高灵敏捕捉，不仅不需要外加光源使得仪器设备简单廉价，而且避免了光源的不稳定以及瑞利散射和拉曼散射引起的背景噪音。酶催化的化学发光检测具有操作简单、高灵敏等特点非常适合与毛细管电泳联用。
　　 本论文主要设计了一种新颖的固定化酶流通接口用于毛细管电泳化学发光检测。各项研究工作简述如下:
　　 (1)设计一种基于固定化酶的毛细管电泳柱后检测接口
　　 本实验将具有独特高催化效率的酶反应应用到毛细管电泳中，设计了一种新颖的固定化酶检测接口，用以放大检测信号提高灵敏度。利用共价键和作用，将辣根过氧化物酶固定于醛基纸膜上，在流通池中催化鲁米诺-过氧化氢-溴酚蓝化学发光体系。自行设计的固定化酶发光流通池，能使酶及时催化过氧化氢产生活性氧，与毛细管中分离的鲁米诺发生化学发光反应。以鲁米诺为分析物检测所设计接口的性能，在最优的实验条件下，鲁米诺在0.1-300μM范围内与化学发光强度呈良好的线性关系，峰高和迁移时间的相对标准偏差分别低于7.5％和8.2％，在连续重复50次进样后，检测信号保持较好的稳定性和重复性。
　　 (2)基于固定化酶检测接口的开管毛细管电色谱-化学发光检测生物胺
　　 本实验将接有巯基的β-环糊精(β-CD-SH)做为活性基团，纳米金作为支撑，先合成β-CD-SH修饰的纳米金，再将这种修饰了的纳米金作为固定相涂布于毛细管内壁中制作开管毛细管电色谱柱。本实验组延续使用了前面工作中设计的固定化酶检测接口和鲁米诺-过氧化氢-溴酚蓝化学发光体系，采用三乙胺高效催化生物胺与N-(4-氨基丁基)-N-乙基异鲁米诺的衍生反应，再通过开管毛细管电色谱-化学发光联用技术进行分离分析检测。在最优的实验条件下，Gly在0.5-200μM范围内与化学发光强度呈良好的线性关系，甘氨酸的检测限(S/N=3)能达到0.12μM。样品在13分钟内完成检测，理论塔板数达到22500。对人唾液和尿液样品进行测定，取得较好的分析检测结果。

目录

声明

摘要

缩写符号对照表

第1章 绪论

1．1 毛细管电泳及其特点

1．1．1 毛细管电泳的基本原理

1．1．2 毛细管电泳的特点

1．1．3 毛细管电泳的分离模式

1．1．4 毛细管电色谱

1．2 化学发光

1．2．1 化学发光分析基本原理

1．2．2 鲁米诺化学发光反应

1．3 毛细管电泳与化学发光联用技术

1．3．1．毛细管电泳化学发光接口技术

1．3．2 毛细管电泳化学发光联用技术在药物分析中的应用与发展

1．4 本文研究思路及创新点

参考文献

第2章 一种基于固定化酶的毛细管电泳柱后检测接口

2．1 引言

2．2 实验材料和方法

2．2．1 材料与试剂

2．2．2 固定化酶毛细管检测接口的设计

2．2．3 制作固定化酶反应器

2．2．4 仪器和操作

2．2．5 固定化酶的活性评价

2．3 结果与讨论

2．3．1 固定化酶反应器的特性

2．3．2 优化CE-CL检测的条件

2．3．3 分析参数

2．4 结论

参考文献

第3章 基于固定化酶检测接口的开管毛细管电色谱化学发光法检测生物胺

3．1 引言

3．2 实验材料和方法

3．2．1 材料与试剂

3．2．2 合成β-CD-SH修饰的纳米金

3．2．3 OTCEC柱的制作

3．2．4 Gly的ABEI衍生

3．2．5 仪器和操作

3．2．6 普通常用鞘流柱后接口OTCEC-CL检测模式

3．3 结果与讨论

3．3．1 OTCEC柱的表征

3．3．2 优化OTCEC-CL检测的条件

3．3．3 分析性能

3．3．4 分析人体唾液和尿液样品

3．4 结论

参考文献

致谢

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