小鼠脾淋巴细胞中Th17细胞分化诱导及转录因子RORγt、RORα、STAT3、CtBP、Gfil表达

摘要

目的：⑴建立小鼠脾淋巴细胞体外Th17细胞分化模型。⑵观察Th17细胞分化过程中转录因子RORγt、RORα、STAT3、CtBP、Gfi1表达。 方法：①6～8周龄C57/BL6J小鼠，采用颈椎脱臼法处死，无菌取出小鼠脾脏，制备小鼠脾细胞悬液。②将C57/BL6J小鼠脾细胞悬液通过免疫磁珠法分离纯化CD4+CD62L+初始T细胞，用台盼蓝染色作细胞计数及活力鉴定。③用抗鼠CD3ε(2μg/ml)包被培养皿，用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基按2×106/ml比例重悬浮CD4+CD62L+初始T细胞，将细胞分为Th17分化组及对照组。Th17分化组加入抗鼠CD28（5μg/ml）、IL-4(10μg/ml)、IFN-γ(10μg/ml)抗体及IL-6(50 ng/ml)、TGF-β1(1 ng/ml)、IL-23(5 ng/ml)，对照组中加入等量培养液，在37℃5％ CO2培养箱中培养48h。④收集各组细胞，提取RNA，采用Real-time PCR检测RORγt、RORα、STAT3、CtBP、Gfi1、IL-17A、IL-17FmRNA表达。 结果：⑴细胞经相关抗体及细胞因子刺激48h后，Th17分化组CD4+CD62L+初始T细胞出现定向分化。对照组细胞呈圆形，散在悬浮于培养液中。Th17分化组细胞增殖明显，聚集成团，细胞分裂活跃，分布于培养皿底部。⑵Th17分化组RORγt、RORα、STAT3、IL-17A、IL-17F mRNA表达比对照组明显增高(P＜0.01)，而CtBP、Gfi1 mRNA表达明显降低(P＜0.01)。 结论：①抗鼠CD3ε、CD28、IFN-γ、IL-4抗体及细胞因子IL-6、TGF-β1、IL-23可成功诱导小鼠脾CD4+CD62L+初始T细胞向Th17细胞分化。②在小鼠脾Th17细胞分化过程中伴有RORγt、RORα、STAT3 mRNA表达上调，而CtBP、Gfi(1)mRNA表达下调。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 研究背景

1．2 研究目的

1．3 研究内容

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

2．3 统计学方法

3 结果

4 讨论

5 小结

参考文献

综述 Th17细胞分化影响因素研究进展

致谢

附录一：缩写词中英文对照

附录二：在读期间的科研情况