学 号 112015408002263
摘 要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1概述
1.2人血小板衍生生长因子
1.2.1人血小板衍生生长因子介绍
1.2.2人血小板衍生生长因子受体及信号通路
1.2.3人血小板衍生生长因子的应用
1.3家蚕转基因过表达体系
1.3.1家蚕转基因技术的建立与发展
1.3.2家蚕转基因技术的应用
第二章 引言
2.1研究背景与目的
2.2主要研究内容
2.2.1转PDGF家蚕的获得及分子检测
2.2.2转PDGF家蚕蚕丝中重组蛋白的分离纯化与活性检测
2.2.3 PDGF重组蚕丝促进细胞增殖的活性检测
2.3技术路线
第三章 转PDGF家蚕的获得及分子检测
3.1材料与方法
3.1.1实验材料、试剂及仪器
3.1.2主要溶液及配制
3.1.3 PDGF基因的合成
3.1.4家蚕转基因表达载体的构建
3.1.5转基因载体的显微注射与后代荧光筛选
3.1.6基因组PCR
3.1.7反向PCR
3.1.8荧光定量PCR
3.1.9重组蛋白的表达检测
3.2结果与分析
3.2.1 PDGF基因的合成
3.2.2家蚕转基因表达载体的构建
3.2.3培育转基因家蚕
3.2.4 PDGF基因插入位点的鉴定
3.2.5 PDGF基因的转录分析
3.2.6重组PDGF蛋白的表达检测
3.3讨论
第四章 转PDGF家蚕蚕丝中重组蛋白 的分离纯化与活性检测
4.1材料与方法
4.1.1实验材料、试剂及仪器
4.1.2主要溶液及配制
4.1.3重组PDGF蛋白的提取与分离纯化
4.1.4 NIH/3T3细胞培养
4.1.5促细胞增殖活性
4.1.6促细胞迁移活性
4.2结果与分析
4.2.1重组PDGF蛋白的分离纯化
4.2.2重组PDGF蛋白具有促进细胞增殖的活性
4.2.3重组PDGF蛋白具有促进细胞迁移的活性
4.3讨论
第五章 PDGF重组蚕丝素材的功能研究
5.1材料与方法
5.1.1实验材料、试剂及仪器
5.1.2主要溶液及配制
5.1.3扫描电镜观察
5.1.4红外光谱分析
5.1.5力学性能测试
5.1.6细胞毒性
5.1.7促细胞增殖活性
5.1.8重组PDGF蛋白的释放特征分析
5.1.9蛋白质印迹
5.2结果与分析
5.2.1 PDGF重组蚕丝的基本性质
5.2.2 PDGF重组蚕丝不具有细胞毒性
5.2.3 PDGF重组蚕丝具有促进细胞增殖的活性
5.2.4重组PDGF蛋白的释放特征
5.2.5 PDGF重组蚕丝浸提液激活ERK通路
5.3讨论
第六章 总结与讨论
参考文献
在学期间所发表的文章情况
致 谢
