声明
第1章 文献综述
1.1 性别决定
1.1.1 遗传性别决定机制
1.1.2 环境性别决定机制
1.2 果蝇的性别决定
1.2.1 果蝇性别决定通路
1.2.2 果蝇中PSI基因的研究
1.3 家蚕的性别决定
1.3.1 家蚕性别通路
1.3.2 家蚕BmPSI基因的研究
1.4 家蚕BmSPX的发现
第2章 引言
2.1 研究背景
2.2 目的与意义
2.3 研究内容
2.4 技术路线
第3章 家蚕BmPSI的蛋白性质及表达谱分析
3.1 实验材料与试剂
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验试剂及仪器
3.1.3 实验主要溶液配制
3.2 实验方法与步骤
3.2.1 定量引物设计
3.2.2 蛋白性质在线分析
3.2.3 五龄第三天各组织RNA的提取
3.2.4 cDNA合成
3.2.5 Actin3检测cDNA质量
3.2.6 荧光定量PCR
3.3结果与分析
3.3.1 BmPSI蛋白性质分析
3.3.2 BmPSI蛋白结构预测
3.3.3 BmPSI各组织表达定量分析
3.4 讨论
第4章 BmPSI蛋白表达及性质研究
4.1 实验材料与试剂
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验试剂和仪器
4.1.3 实验主要溶液配制
4.2 实验方法与步骤
4.2.1 BmPSI全长引物的设计
4.2.2 BmPSI的克隆
4.2.3 重组原核表达载体的构建
4.2.4 蛋白小量诱导表达检测
4.2.5 BmPSI蛋白原核诱导表达及纯化
4.2.6抗体制备及抗体效果检测
4.2.7 BmPSI在家蚕组织表达检测
4.2.8 BmPSI时期表达情况检测
4.2.9 BmPSI蛋白亚细胞定位
4.2.10 BmPSI蛋白二级结构测定
4.2.11 不同BmPSI剪切形式的发现
4.3结果与分析
4.3.1 BmPSI的克隆和载体构建
4.3.2 BmPSI的小量诱导表达
4.3.3 MBP-BmPSI蛋白的纯化
4.3.4 纯化后的BmPSI蛋白送制抗体，并进行蛋白二级结构测定
4.3.5 BmPSI多克隆抗体效果检测
4.3.6 蛋白水平检测BmPSI在精、卵巢中的表达
4.3.7 蛋白水平检测BmPSI在家蚕五起之后的表达情况
4.3.9 BmPSI的蛋白定位
4.4 讨论
第5章 对BmPSI结合CE1的关键位点研究
5.1 实验材料与试剂
5.1.1实验材料
5.1.2 实验试剂和仪器
5.1.3 实验主要溶液配制
5.2 实验方法与步骤
5.2.1 KH_1结构域截短蛋白的纯化
5.2.2 借助BCA试剂盒调平蛋白浓度
5.2.3 截短蛋白的凝胶阻滞（EMSA）实验
5.2.4 BmPSI中KH_1结构域多序列比对
5.2.5 KH_1-1关键氨基酸位点的突变引物设计
5.2.6 突变蛋白原核表达菌株的构建
5.2.7 突变蛋白的诱导表达和纯化
5.2.8 突变蛋白浓度调平及凝胶阻滞（EMSA）实验
5.2.9等温滴定量热法检测蛋白与RNA的结合能力
5.2.10 对I116G、L127G及mut IGGI突变蛋白二级结构的检测
5.3 实验结果与分析
5.3.1 BmPSI的截短设计
5.3.2 BmPSI的截短片段PCR扩增
5.3.3 BmPSI截短蛋白原核表达重组载体的构建
5.3.4 BmPSI截短蛋白的表达及纯化
5.3.5 截短蛋白浓度调平后的EMSA（凝胶阻滞）实验
5.3.6 KH_1多序列比对寻找结合RNA的关键氨基酸位点
5.3.7 BmPSI潜在关键结合位点的克隆及突变蛋白的表达
5.3.8 突变蛋白浓度调平后的EMSA（凝胶阻滞）实验
5.3.9 ITC检测BmPSI及3种关键位点突变蛋白结合CE1的能力
5.3.10 对I116G、L127G及mut IGGI突变蛋白二级结构的检测
5.4 讨论
第6章 对SlPSI结合CE1区段的保守性研究
6.1 实验材料与试剂
6.1.1实验材料
6.1.2 实验试剂和仪器
6.1.3 实验主要溶液配制
6.2 实验方法与步骤
6.2.1 PSI基因进化树分析
6.2.2 Sldsx基因序列分析
6.2.3 多物种PSI蛋白KH_1-1氨基酸多序列比对
6.2.4 SlPSI基因的克隆及原核表达载体构建
6.2.5 SlPSI的原核诱导表达及蛋白纯化
6.2.6 SlPSI与CE1探针之间的EMSA实验
6.2.7 SlPSI突变蛋白的设计引物合成
6.2.8 SlPSI突变蛋白的纯化
6.2.9 SlPSI突变蛋白的EMSA实验
6.3 实验结果与分析
6.3.1 PSI基因进化树分析
6.3.2 Sldsx基因序列分析
6.3.3 PSI基因物种间多序列比对
6.3.4 SlPSI基因的克隆及原核表达载体的构建
6.3.5 SlPSI蛋白的表达纯化
6.3.6 SlPSI蛋白与CE1结合的验证
6.3.7 SlPSI结合CE1潜在关键位点突变蛋白的克隆
6.3.8 SlPSI突变蛋白的EMSA结合实验
6.4 讨论
第7章 BmPSI互作蛋白BmSPX的功能研究
7.1 材料与方法
7.1.1实验材料
7.1.2 实验仪器
7.1.3 实验试剂
7.2 实验方法
7.2.1 增量表达BmSPX的转基因品系的获得
7.2.4 BmSPX与BmPSI的结合验证
7.2.5 BmSPX的亚细胞定位
7.2.6 BmSPX与BmPSI的结合验证
7.3结果与分析
7.3.1 BmSPX转基因增量表达品系的建立
7.3.2 Over-BmSPX品系的转基因情况检测
7.3.3 Over-BmSPX品系家蚕表型观察
7.3.4 BmSPX蛋白性质分析
7.3.5 BmSPX蛋白结构预测
7.3.6 Over-BmSPX品系中家蚕性别关键基因的表达检测
7.3.7 BmSPX与BmPSI的结合验证实验
7.3.8 BmSPX蛋白定位
7.3.9 BmSPX与BmMasc之间互作研究
7.4 讨论
第8章 综合与讨论
8.1 家蚕BmPSI的蛋白性质及表达谱分析
8.2 BmPSI蛋白表达及性质研究
8.3 BmPSI结合CE1的关键位点研究
8.4 SlPSI结合CE1区段的保守性研究
8.5 BmSPX的功能研究
参考文献
在读期间发表论文及参研课题
发表文章
参研课题
致谢
西南大学;
