声明
第一章 文献综述
1.1 昆虫变态发育
1.2昆虫20E信号通路
1.2.1 20E的生物合成
1.2.3 20E合成酶基因的转录调控
1.2.3 20E的转运
1.2.4 20E的信号转导
1.3昆虫JH信号通路
1.3.1 JH滴度的周期性变化
1.3.2 JH的信号传导
1.3.3 JH信号转录因子Kr-h1
1.4蛋白合成的调控
1.4.1 蛋白合成过程
1.4.2 核糖体RNA
1.4.3 蛋白合成的调控机制
第二章 引 言
2.1 研究背景及目的意义
2.2 研究内容
2.2.1 JH信号转录因子Kr-h1对昆虫20E合成的抑制作用
2.2.2 Kr-h1抑制昆虫20E合成酶基因转录的分子机制
2.2.3 20E对昆虫脂肪体中蛋白合成的影响
第三章JH信号转录因子Kr-h1对昆虫20E合成的抑制作用
3.1 实验材料与试剂
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验试剂及仪器
3.2 实验方法与步骤
3.2.1主要溶液配制
3.2.2处女蝇的收集与果蝇杂交
3.2.3 RNA提取
3.2.4 cDNA反转录
3.2.5 RT-PCR
3.2.6 Q-PCR
3.2.7 探针的制备
3.2.8 原位杂交
3.3.9 免疫荧光
3.3.10酶免疫分析（Enzyme Immunoassay，EIA)
3.3.11 EdU染色
3.3实验结果
3.3.1 JH类似物处理延迟果蝇和家蚕化蛹时间并抑制20E合成
3.3.2 JH类似物处理抑制果蝇和家蚕PG中20E合成酶基因的转录
3.3.3果蝇和家蚕Kr-h1和20E合成酶基因在PG中的表达模式
3.3.4果蝇PG中DmKr-h1表达的改变影响发育进程及20E合成
3.3.5果蝇PG中特异过表达DmKr-h1对发育及20E合成的影响
3.3.6添食Ecdysone或20E挽救PG中过表达DmKr-h1所导致的表型
3.3.7果蝇PG中的Kr-h1表达改变不影响细胞核内复制
3.4讨论
第四章 Kr-h1抑制昆虫20E合成酶基因转录的分子机制
4.1 实验材料与试剂
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验试剂及仪器
4.2 实验方法与步骤
4.2.1 主要溶液配制
4.2.2 细胞培养
4.2.3 WesternBlot
4.2.4 荧光素酶活活性分析
4.2.6 凝胶阻滞分析（EMSA）
4.2.5 染色质免疫共沉淀（ChIP）
4.2.6 Bisulfite分析DNA甲基化水平
4.3实验结果
4.3.1果蝇和家蚕20E合成酶基因启动子上存在Kr-h1结合位点KBS
4.3.2 JHM处理和Kr-h1过表达抑制果蝇20E合成酶基因启动子活性
4.3.4 JHM处理和Kr-h1过表达抑制家蚕20E合成酶基因启动子活性
4.3.4 Kr-h1通过KBS抑制DmSpok/BmSpo启动子活性
4.3.5 ChIP-PCR实验表明Kr-h1与KBS直接结合
4.3.6 EMSA实验表明Kr-h1与KBS直接结合
4.3.7 Kr-h1诱导Dmspok/BmSpo启动子区发生DNA甲基化
4.4讨论
第五章 20E对昆虫脂肪体中蛋白合成的影响
5.1 实验材料与试剂
5.1.1 实验材料
5.1.2 实验试剂
5.2实验方法与步骤
5.2.2 荧光原位杂交
5.3 实验结果
5.3.1用嘌呤霉素检测果蝇和家蚕蛋白合成水平
5.3.2脂肪体中蛋白合成水平在变态发育期的动态变化
5.3.3 20E抑制脂肪体中的蛋白合成
5.3.4 20E抑制脂肪体中的核糖体水平
5.3.5 20E减小脂肪体中核仁的大小
5.4 讨论
第六章 综合与结论
论文的创新点
参考文献
引物附表
博士期间发表论文及参研课题
致谢
