抗病毒及抗膜补体调节蛋白双特异性抗体的制备及效应研究

摘要

目前尚缺乏有效的控制病毒感染的手段.补体系统因为具有可以直接溶解病毒、中和病毒感染、调理病毒吞噬,建立一线防御等方面的功能和优势而对病毒感染性疾病的防治具有重要意义.然而遗憾的是,由于病毒在长期的演化过程中获得了逃避补体攻击的机制,而使得补体系统在抗病毒免疫中的功能和优势不能充分发挥.为了充分发挥补体系统在抗病毒感染中的优势和潜力,该研究提出了通过消除病毒逃避补体攻击的机制来恢复病毒对补体的敏感性,同时通过诱导补体活化来提高补体的抗病毒效率的设想,并对该设想进行了验证.根据该实验的结果我们可以得出下面的结论:1)病毒在出芽的过程中结合的宿主膜补体调节蛋白CD55、CD59可以作为消除病毒逃避补体攻击的机制,提高补体抗病毒效率这一策略的靶点;2)可以通过制备针对病毒抗原及病毒表面的补体调节蛋白的,含Fc段的双特异性三功能抗体实现特异性消除病毒表面的补体调节蛋白对病毒的保护作用,恢复病毒对补体的敏感性,诱导内源性补体活化,提高补体的抗病毒效率的目的;3)能够结合CD55抗原的,含人Fc段的

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前 言

第一部分HIV病毒、EEV病毒对补体攻击的抵抗作用及CD55、CD59中和性抗体对补体抗病毒效率的影响

第一节HIV病毒对补体攻击的抵抗作用及CD55、CD59中和性抗体对补体抗病毒效率的影响

第二节EEV病毒对补体攻击的抵抗效应及CD55、CD59中和性抗体对补体抗病毒效率的影响

第二部分anti-EEV*anti-CD55双特异性抗体的制备、纯化及其对EEV病毒的中和效应研究

第一节小鼠抗人CD55抗体及兔抗EEV抗体的制备及纯化

第二节双特异性抗体的制备、纯化及抗原结合特异性分析

第三节anti-EEV*anti-CD55双特异性抗体对EEV病毒的中和效应研究

第三部分CD55单抗可变区基因片段的克隆、“IgG”型基因工程双特异性抗体的构建、表达及其初步的结合功能研究

第一节CD55单抗杂交瘤细胞总RNA的提取及抗体可变区VH、VL片段的RT-PCR扩增

第二节CD55抗体VH、VL片段的亚克隆及“IgG”型双特异性基因工程抗体的构建

第三节含CD55抗体可变区的“IgG”型双特异性抗体的真核表达及其表达产物的初步结合功能分析

总 结

照 片

致谢

参考文献

附录一

附录二

文献综述一补体系统在抗病毒感染中的作用

参考文献

文献综述二抗体工程研究进展及双特异性抗体的设计、效应系统及应用前景分析

参考文献

文献综述三HIV病毒免疫逃避的机制及其防治研究进展

参考文献

攻读学位期间发表的文章