人CD4CD25T细胞与CD4CD25T细胞差异蛋白质组学研究

摘要

该文通过对人CD4<'+>CD25<'+>T细胞以及CD4<'+>CD25<'->T细胞的蛋白质组表达差异分析以及差异蛋白的鉴定,以期探索CD4<'+>CD25<'+>T与CD4<'+>CD25<'->T细胞功能差异的分子基础,为进一步筛选特异性功能相关蛋白和干预靶拉提供基础.首先,我们应用磁珠分选法从人脾脏中成功分离纯度较高的CD4<'+>CD25<'+>T与CD4<'+>CD25<'->T细胞并对其功能进行了功能试验分析,结果发现人脾脏源性天然CD4<'+>CD25<'+>T细胞具有免疫低反应性并且对CD4<'+>CD25<'->T免疫反应有明显抑制作用.即说明人脾脏源性天然CD4<'+>CD25<'+>T细胞具有调节性细胞特性.与人CD4<'+>CD25<'->T细胞功能存在明显差异.随后我们用双向凝胶电泳技术对分选的CD4<'+>CD25<'+>T细胞CD4<'+>CD25<'->T细胞全蛋白质进行分离,获得了对全细胞蛋白质较好显示的凝胶,通过运用图象分析软件对数字化量化比较分析,建立了蛋白质组差异表达图谱.二种细胞的蛋白质且在分布模式上大体相似,蛋白质点集中显示于等电点介于pH4至8和分子量介于14kDa至65kDa的范围,CD4<'+>CD25<'->T细胞胶图上平均显示704个点,CD4<'+>CD25<'+>T细胞平均685个点.软件分析比对,发现表达水平差幅在4倍以上的共有25个蛋白质点,其中17个在CD4<'+>CD25<'->T细胞表达水平较高,而8个点在CD4<'+>CD25<'+>T细胞表达水平较高.最后,我们切取25个差异蛋白点进行胶内酶解,运用肽质量指纹谱鉴定策略,从中成功鉴定15个点,其中CD4<'+>CD25<'->T细胞13个,CD4<'+>CD25<'+>T细胞2个.在成功鉴定的蛋白质点中,CD4<'+>CD25<'->T细胞表达水平较高的蛋白质包括多种代谢相关酶类和结构蛋白,还有信号转导相关蛋白(LCKBP1)、热休克蛋白70分子伴侣家族成员(Bip蛋白),信号分子lasp-1,凋亡相关分子(Caspase-7B链)等,CD4<'+>CD25<'+>T细胞表达水平较高的二种均为核酸代谢相关蛋白质.上述结果为相关分子进一步功能研究奠定了基础.

目录

英文缩写简表

前言

材料与方法

结果

讨论

全文结论

参考文献

致谢

文献综述 差异蛋白质组学技术及进展

参考文献

攻读博士期间发表论文