基于“当归补血汤”的美白化妆品的开发及其美白作用机制研究

摘要

本文以酪氨酸酶抑制率和DPPH自由基清除率的综合评分为指标，对当归补血汤中的美白活性物进行提取、纯化和安全性评价，并进一步探讨其对酪氨酸酶抑制作用的类型和美白机理，最后对其进行相应的应用研究，为天然中药复方美白剂的开发和推广提供了基础思路和理论依据。本文研究内容如下：
　　1）以综合评分为指标，运用均匀设计法探索当归补血汤美白功效的最佳药效配比。结果显示，基于美白功效，当归补血汤的配伍最佳剂量组合为黄芪-当归（1:7），对酪氨酸酶活性的抑制率89.65％，对DPPH自由基的清除率90.96%。
　　2）以综合评分为指标，运用单因素试验考察料液比、提取溶剂和提取温度对综合评分的影响，再建立三因素三水平响应面分析试验，进行多元回归拟合分析优选出当归补血汤美白活性物最佳的提取工艺为：料液比1:12 g/mL，乙醇浓度为65%，提取温度为92℃。通过验证试验，实际值与模型预测的理论值基本相符。
　　3）采用大孔树脂吸附法对所提取得到的当归补血汤美白活性物进行纯化，确定最优纯化工艺为：上样浓度0.4 g/mL，药液pH为3，洗脱剂70%乙醇，洗脱剂pH为9，洗脱速度2 mL/min，洗脱量200 mL。通过离体牛眼角膜浊度法和RBC溶血试验对当归补血美白素进行安全性评价。结果显示，在牛眼角膜浊度试验中，所得IVIS值均小于0，刺激性结果为温和，不具有眼刺激性。RBC溶血试验中，半数溶血率HC50=0.0308 g/mL，可认为当归补血美白素无刺激性。
　　4）通过动力学分析，当归补血汤美白活性物对单酚酶基本没有抑制作用；对二酚酶是可逆性抑制，其半数抑制浓度为311.24 mg/mL。利用Lineweaver-Burk双倒数作图法试验分析得出抑制常数KI和KIS分别为0.0048 mg/mL和0.0062 mg/mL，可确定当归补血汤美白活性物的抑制类型为混合型抑制。
　　5）在基质配方的基础上，探讨乳化剂和增稠剂两个体系以及当归补血美白素的添加量对肤感和稳定性的影响，从而研制当归补血美白霜，并进行人体皮肤斑贴实验和美白功效评价。结果表明，最佳乳化剂体系为Olivem?1000和酶解卵磷脂复配体系，最佳增稠剂体系为1%的Sepiplus400、0.1%的汉生胶和0.3%的VP共聚物复配体系，当归补血美白素的添加范围为0.5~1.5%，且安全无刺激，人体美白功效测试结果显示其起效最佳添加量为1.5%，在使用90天后可使皮肤黑色素值降低约37。