广西醋莪术活血化瘀物质基础研究

摘要

目的：中药莪术是姜科植物蓬莪术(Curcuma phaeocaulisValeton)、广西莪术(Curcuma kwangsiensisS.G.Lee et C.F.Liang)和温郁金(CurcumawenyujinY.H.Chen et C.Ling)的干燥根茎，具有行气破血、消积止痛的功效，用于治疗淤血闭经，食积胀痛等症。现代研究表明其有明显的抗肿瘤、抗血管生成作用，是临床上常用的活血化瘀药物。虽然三种莪术在临床上的应用大致相同，但成分却有一定的差异。广西莪术的化学成分与其活血化瘀的药效之间的相关性研究还未见报道。因此本课题通过对广西莪术活血化瘀药效及其有效部位的化学成分进行探讨，为其进一步开发、利用提供实验依据。
　　方法：
　　1.醋莪术活血化瘀有效剂量的确定。SD大鼠40只，雌雄各半，随机分成正常对照组，模型组（造模不给药），醋莪术高（3.72g·kg-1）、中（1.86g·kg-1）、低（0.93g·kg-1）剂量组，每组8只。除正常对照组外，其余各组以每日冰水游泳和束缚建立寒凝气滞血瘀模型，成模后连续给药三天，于第四天取材，通过凝血时间、血液流变学等指标考察莪术活血化瘀的有效剂量。
　　2.醋莪术活血化瘀有效部位的研究。SD大鼠50只，随机分为5组，每组10只，即正常对照组，模型组（造模不给药），乙酸乙酯部位组（A）、醇部位组（B）、水部位组（C），造模成功后给以相应醋莪术提取物，以各组大鼠凝血时间、血液流变学、凝血酶原时间，部分活化凝血酶时间和凝血酶时间等指标评价药效。
　　3.醋莪术活血化瘀的有效部位的成分分离及结构鉴定。将提取到的有效部位上硅胶柱，依次以环己烷:乙酸乙酯（15:1）、环己烷：乙酸乙酯（10:1）、环己烷:乙酸乙酯（10:3）、环己烷:乙酸乙酯（2:1）、二氯甲烷:甲醇（15:1）、二氯甲烷:甲醇（1:1）梯度洗脱，再将量大的馏分过凝胶柱脱色素，通过制备液相分离纯化后利用UV、ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT鉴定化合物结构。
　　4.醋莪术有效部位中分得的单体成分进行活性初筛。以HUVEC和A549为模型，分别给以不同浓度梯度的姜黄素（阳性对照）和各单体成分，分别于给药24h、48h后用MTT法检测细胞存活率，考察各成分的抗血管生成和抗肿瘤活性。
　　结果：
　　1.醋莪术水煎液高（3.72g·kg-1）、中（1.86g·kg-1）、低（0.93g·kg-1）剂量组均可缩短凝血时间，降低血浆、全血粘度以及全血高、中、低切相对指数，提示其有抗凝的作用并呈剂量依赖性，醋莪术不同部位均显示一定的抗凝血活性，其中以乙酸乙酯部位活血化瘀效果最佳。
　　2.从醋莪术乙酸乙酯部位分离纯化得到了7个单体成分，其中Zederone（1）、吉马酮（2）、curzerene（5）、furanodienone（6）为倍半萜类化合物，1-(3,4-dihydroxy-phenyl)-7-(4-hydroxyphenyl)-(6E)-6-hepten-3-ol（3）、(3R,5R)-3,5-diacetoxy-1-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-(4-hydroxyphenyl)heptane（4）、1,7-bis(4-hydroxyphenyl)hepta-4E-6E-dien-3-one（7）为姜黄素类化合物。
　　3.分离得到的单体成分中，化合物3、4、6、7显著抑制HUVEC的生长，表现出较好的抗血管生成作用。化合物3、5、6、7显著抑制A549的生长，表现出较好的抗肿瘤作用。其中化合物7抗肿瘤和抗血管生成作用均优于阳性对照姜黄素。
　　结论：醋莪术乙酸乙酯部位具有较好的活血化瘀作用，从其中分离得到的单体成分7具有较好的抗血管生成作用和抗肿瘤作用，可能是广西醋莪术活血化瘀作用的主要活性成分。

目录

声明

第一章 序言

1.1莪术的化学成分

1.2莪术的药理作用

1.3莪术临床应用概述

1.4莪术不同产地、不同炮制品研究进展

1.5选题的内容和意义

第二章 广西醋莪术活血化瘀有效部位的筛选

第一节 莪术的提取及药效-剂量关系探讨

第二节 醋莪术活血化瘀作用不同部位的研究

第三章 醋莪术乙酸乙酯部位的分离

3.1实验材料

3.2实验方法

3.3莪术中化合物的结构鉴定

3.4讨论

第四章 莪术中单体成分对HUVEC和A549增殖的影响

4.1.实验材料

4.2.实验方法

4.3.实验结果

4.4.讨论

总结与展望

一、总结

二、展望

参考文献

附录

攻读硕士期间发表论文

致谢