蚕蛹蛋白酶解产物抗氧化和抑制肿瘤增殖活性研究

摘要

蚕蛹（Bombyx mori）是卫生部批准的“作为普通食品管理的食品新资源名单”中唯一的昆虫类食品，具有很高的营养和药用价值。蚕蛹中粗蛋白含量高达60-70％，蚕蛹蛋白的酶解产物在抗氧化、抗肿瘤、抗菌、免疫等方面具有广泛的活性。本课题以蚕蛹蛋白为原料，通过酶解制备生物活性肽，对提高蚕蛹蛋白的利用价值，满足市场需求具有重要意义。
　　本研究采用Alcalase、Trypsin、Papain、Flavourzyme、Neutrase和Protamex等6种蛋白酶对蚕蛹蛋白进行水解，研究了酶种类、水解度(DH)对酶解产物的氧自由基吸收能力(ORAC)、还原力(FRAP)、清除DPPH自由基能力和体外细胞抗氧化活性(CAA)等抗氧化能力的影响。结果表明:酶解产物均具有一定的抗氧化能力，通过主成分分析发现，Neutrase酶解产物(NH)的总抗氧化能力最高，其中DH为15％的NH的抗氧化能力最强。
　　MTT比色法检测相同DH的蚕蛹蛋白酶解产物(SPPHs)对肿瘤细胞（人肝癌细胞HepG-2、人肺癌细胞A549、人胃腺癌细胞MGC-803）的增殖抑制活性。结果表明:SPPHs对HepG-2和A549的增殖无明显的抑制效果，但对MGC-803的增殖抑制作用显著，其中以Alcalase酶解产物(AH)的增殖抑制率最高，在酶解产物质量浓度为0.3mg/mL时，抑制率可达到96.46％。不同DH的AH对体外肿瘤细胞的增殖抑制活性研究表明:DH=25％的AH抑制率最高。
　　在确定酶种类和DH的基础上，本研究采用膜超滤对DH=25％的AH进行超滤(5k、10k、30k)分离，并对各组分进行肿瘤细胞增殖抑制活性研究，结果表明分子量＜5k的组分对MGC-803的增殖抑制率最高;对该组分（分子量＜5k）进行葡聚糖凝胶层析（G-25）后，分离出4个组分(a，b，c，d)，其中组分b对MGC-803细胞的增殖抑制率最高，与分子量＜5k的超滤组分相比，抑制率显著降低，推测葡聚糖凝胶层析分离出的4个组分之间可能存在协同效应。
　　对综合抗氧化能力最强的NH和对MGC-803增殖抑制率最高的AH的加工特性（溶解性、乳化性、热稳定性等）进行了研究。结果表明:AH和NH的溶解性、热稳定性和乳化稳定性等功能特性均得到显著改善，乳化活力略有下降。表明这两种酶解产物不但具有良好的抗氧化和抑制肿瘤细胞增殖活性还具有良好的加工特性，适合进一步研究开发，可作为食品基料或添加剂应用于食品、化妆品等加工行业。该研究为蚕蛹蛋白源生物活性肽的应用提供了一定的理论基础，具有一定的研究意义。

目录

声明

摘要

1 绪论

1．1 生物活性肽概况

1．2 抗肿瘤活性肽研究进展

1．2．1 抗肿瘤活性肽的天然来源及新型制备技术

1．2．2 抗肿瘤活性肽的分离纯化与活性检测

1．2．3 抗肿瘤活性肽的构效关系

1．2．4 抗肿瘤活性肽的作用机制

1．2．5 展望

1．3 抗氧化活性肽研究进展

1．3．1 抗氧化活性检测方法

1．3．2 抗氧化活性肽的作用机制

1．3．3 抗氧化活性肽存在的问题与展望

1．4 蚕蛹蛋白的生物活性研究现状

1．5 本课题研究目的和方案

1．5．1．研究目的和意义

1．5．2 研究内容和方案

2 蚕蛹蛋白酶解产物的抗氧化活性研究

2．1 前言

2．2 材料与方法

2．2．1 材料

2．2．2 方法

2．3 结果与讨论

2．3．1 酶种类对酶解产物抗氧化活性的影响

2．3．2 水解度(DH)对酶解产物抗氧化活性的影响

2．4 本章小结

3 蚕蛹蛋白酶解产物对肿瘤细胞的增殖抑制活性研究

3．1 前言

3．2 材料与方法

3．2．1 原料与试剂

3．2．2 方法

3．3 结果与讨论

3．3．1 蚕蛹蛋白酶解产物对肿瘤细胞的增殖抑制活性

3．3．2 蚕蛹蛋白抗肿瘤活性肽的制备

3．3．3 蚕蛹蛋白抗肿瘤活性酶解产物的分离纯化

3．4 本章小结

4 蚕蛹蛋白酶解产物的功能特性

4．1 前言

4．2 材料与方法

4．2．1 试验原料

4．2．2 试剂与仪器

4．2．3 试验方法

4．3 结果与讨论

4．3．1 SPPHs的溶解性

4．3．2 SPPHs的乳化性

4．3．3 SPPHS的热稳定性

4．4 本章小结

5 全文总结及展望

5．1 结论

5．2 创新点

5．3 展望

参考文献

致谢

作者简介

导师简介