水溶性绿茶多糖的系统分级纯化及其免疫活性与清除羟自由基活性的研究

摘要

多糖因具有多种生物活性越来越引起人们的重视，为了筛选出高免疫活性和高清除羟自由基活性的多糖组分，将炒青绿茶经水提取后，茶汤用0.2μm孔径的膜过滤，滤液依次经过150kD、20kD、6kD的膜组件进行分级和浓缩。得到150kD、20kD、6kD三部分的截留液。同时对茶渣进行碱提处理，以比较水提绿茶多糖与碱提绿茶多糖的各分级组分理化性质及免疫活性等方面的差异。分别将150kD、20kD、6kD三部分的截留液和碱提多糖依次经过DEAE-52纤维素离子交换层析和丙烯葡聚糖凝胶SephacrylS-300柱层析系统分离、纯化，HPGPC-ELSD鉴定各多糖组分的纯度及分子量分布，并测定了各分级组分对小鼠巨噬细胞系Raw264.7检测免疫活性的影响以及清除羟自由基的活性。结果表明，茶汤中50％以上的干物质能够透过20KD的膜，对于多糖来说，则以20kD膜截留液中含量最高，其占干物质的比重可达到36.86％，150kD膜和6kD膜截留部分中多糖含量分别为27.13％和21.16％，而透过6kD膜部分中占干物的含量则仅为1.09％，由此可见，膜分离处理对于茶多糖的分离纯化效果明显。水溶性绿茶多糖经过系统分级后共得到了20多个分级组分；HPGPC-ELSD鉴定各多糖组分的纯度及分子量分布，结果表明得到7个均一水提多糖组分和两个碱提多糖组分；用小鼠巨噬细胞系Raw264.7检测免疫活性，发现对小鼠巨噬细胞Raw264.7有显著活性的多糖组分大多集中在20kD左右，有较强清除羟自由基的多糖组分大多集中在6kD左右，部分为20kD左右的多糖，且大多为不均一多糖，而碱提多糖的免疫活性相对较低。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略表

声明

第一章绪论

1.1国内外研究现状

1.1.1茶多糖的提取分离

1.1.2茶多糖的纯化

1.1.3茶多糖的纯度鉴定及相对分子质量测定

1.1.4茶叶多糖的含量测定

1.1.5茶叶多糖的理化性质及组成

1.1.6茶叶多糖的生物活性

1.2立题背景与研究意义

1.3主要研究内容

1.4论文主要创新点

第二章系列膜超滤处理在水溶性绿茶多糖初步分离纯化中的应用

2.1材料、试剂与仪器

2.2实验方法

2.2.1膜过滤分级工艺示意图

2.2.2实验上艺流程说明

2.3分离部分内含成分的测定

2.3.1各分离部分的干物重

2.3.2多糖含量的测定

2.3.3蛋白含量的测定

2.3.4氨基酸的测定

2.3.5糖醛酸含量的测定

2.3.6茶多酚和咖啡碱的测定

2.4结果与讨论

2.4.1各分离部分的干物质量变化

2.4.2各分离部分中总糖与多糖的含量变化

2.4.3各分离部分中糖醛酸的含量变化

2.4.4其它化学成分含量的变化

2.5本章小结

第三章膜过滤绿茶多糖及碱提粗多糖的系统分级纯化及纯度的鉴定

3.1材料、试剂与仪器

3.2实验方法

3.2.1绿茶多糖提取及系统分级纯化工艺示意图

3.2.2碱提粗多糖的流程示意图

3.2.3 150kD的截留粗多糖的系统分级纯化

3.2.4 20kD的截留粗多糖的系统分级纯化

3.2.5 6kD的截留粗多糖的系统分级纯化

3.2.6碱提粗多糖的系统分级纯化

3.2.7茶多糖分级组分的HPGPC-ELSD分析

3.3结果与分析

3.3.1绿茶多糖的提取与膜分离

3.3.2 150kD截留液的系统分级纯化

3.3.3 20kD截留液的系统分级纯化

3.3.4 6KD截留液的系统分级纯化

3.3.5碱提绿茶粗多糖系统分级纯化

3.3.6 150kD各分级组分的HPGPC-ELSD分析

3.3.7 20kD各分级组分的HPGPC-ELSD分析

3.3.8 6kD各分级组分的HPGPC-ELSD分析

3.3.9 ATPS各分级组分的HPGPC-ELSD分析

3.4本章小结

第四章茶叶多糖免疫活性及清除羟自由基活性的研究

4.1材料、试剂与仪器

4.2实验方法

4.2.1促NO生成活性的测定

4.2.2促吞噬作用活性测定

4.2.3羟自由基的测定

4.3结果与分析

4.3.1绿茶多糖分级纯化组分对小鼠巨噬细胞生成NO活性的影响

4.3.2绿茶分级纯化多糖组分对小鼠巨噬细胞吞噬中性红的影响

4.3.3绿茶多糖分级组分与清除自由基活性的关系

4.4本章小结

第五章总结

5.1系列膜初步分离纯化水溶性绿茶提取液

5.2绿茶多糖的系统分级纯化以及纯度的鉴定

5.3茶叶多糖结构与生物活性的关系研究

参考文献

致谢

作者简历

硕士期间发表论文情况