高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白B表位诱导中和抗体能力的研究

摘要

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是世界范围内广泛存在的一种危害养猪业的重要传染病。引起该病的病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSvirus,PRRSV)。目前PRRSV的研究还不够深入,对病毒的抗体依赖性增强作用(antibodydependent enhancement,ADE)、持续性感染及中和抗体等问题的研究结果还存有争议。2006年,我国出现了危害更为严重的高致病性PRRSV变异毒株(highly pathogenic porcine reproductive andrespiratory syndrome,HP-PRRSV),给该病的防控带来了更为严峻的挑战。
　　 GP5蛋白上的B表位(37SHL／FQLIYNL45)一直被认为是PRRSV经典毒株的主要线性中和表位。在HP-PRRSV毒株中,B表位有一个氨基酸突变(L／F39I)。为了证实突变对B表位抗原性的影响以及B表位在诱导抗HP-PRRSV中和抗体中发挥的作用,本研究合成了PRRSV经典株CH-1a和HP-PRRSV HuN4的B表位短肽,分别免疫家兔制备了两份特异性多肽抗血清。此外,将表达B表位肽的核酸序列连入pGEX-6P-1表达载体,构建pGEX-B重组表达质粒,诱导表达后获得了B表位肽与GST的融合蛋白(GST-B).经SDS-PAGE和Western blot证实,GST-B融合蛋白获得了正确表达。间接免疫荧光(IFA)检测结果显示,两份多肽抗血清均能与PRRSV经典株和HP-PRRSV毒株发生特异性反应,IFA抗体效价无差异。病毒中和试验结果表明,两份多肽抗血清均不具有中和PRRSV活性。为了证实B表位诱导中和抗体的能力,本研究将12头PRRSV及其抗体均为阴性的健康仔猪,首先以HP-PRRSV HuN4疫苗毒株(HuN4-F112)进行基础免疫,然后用强毒株(HuN4-F5)进行多次接种后制备了猪高免血清。通过间接ELISA和Westernblot测定了猪高免血清中针对B表位肽的抗体水平,通过病毒中和试验测定了猪高免血清中的抗PRRSV中和抗体水平,并比较了两者之间的相关关系。结果表明,同一头猪在不同时期的高免血清中针对B表位肽的抗体水平变化不大,而抗HP-PRRSV中和抗体水平则经历了先升高后降低的过程,两者之间没有正相关关系。此外,将B表位合成肽和GST-B融合蛋白分别与猪高免血清充分混合并孵育后进行中和试验,结果表明两者都没有抑制抗HP-PRRSV中和抗体的能力。以上结果表明,HP-PRRSV B表位的变异对其抗原性没有影响,但B表位在诱导抗HP-PRRSV中和抗体生成过程中没有发挥主要作用,因此推断它在HP-PRRSV上不是一个主要的中和表位。