人参种质资源鉴定的SSR核心引物筛选及其应用研究

摘要

人参(Panax ginseng C.A.Meyer)，又名地精、神草、黄参，是一种多年生五加科人参属的宿根草本药用植物。人参育种的原始材料是其种质资源，种质资源的多样性是人参产业能够可持续发展的基础。为快速精准鉴定人参种质资源，更好的为人参种子产业发展提供技术支撑，进一步优化、完善人参品种审定、品种保护等工作，同时也为了减少鉴定过程中繁琐的引物筛选工作，本文在前人研究基础之上，主要利用SSR分子标记筛选出一套适合人参种质资源研究的核心引物，并对人参品种等种质资源进行了分析，同时也验证了核心引物的有效性。得到下述结论:
　　1.本试验利用分子标记技术，在已有的基础之上，对人参SSR-PCR反应体系和扩增程序进行了优化，并从已有的121对SSR引物中筛选出适合人参种质资源研究的18对SSR核心引物，分别为:G03、G05、PG01、gm129、gm175、gm184、P26、P35、P55、P57、pg29、pg281、pg287、pg668、pg1481、pg1663、GB65、RS10。无论PIC值，还是遗传多样性值，该18对引物均呈现较高的多态性。
　　2.利用已筛选的18对SSR核心引物对人参组织培养材料和田间材料进行了研究。聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳检测结果均表明:在DNA水平上各世代之间遗传物质没有发现明显变化，植物组织培养技术可以作为人参材料保存的一种有效途径。田间材料表现各单株间遗传相对一致。
　　3.利用SSR和RAPD分子标记，对15份人参种质资源进行了分析，RAPD和SSR标记得到的遗传相似系数以及聚类结果表明亲缘关系与地理分布具有相关性。这2种分子标记均能揭示人参种质资源的遗传多样性和亲缘关系，说明本试验所筛选的核心引物具有有效性。
　　4.利用已选出的18对SSR核心引物对国内外7个人参品种（系）进行检测，其中1对引物(P26)可以扩增出4个品种（系）的特异带型，3对引物可以扩增出3个品种（系）的特异带型，这3对引物分别为:G05、pg29、pg1481，引物gm129可以扩增出2个品种（系）的特异带型。最少3对引物的组合P26、G05、pg29可以将H、XH、S、M、PX1、PX2、F27个品种（系）区分开，P26-b、P26-c、P26-d、P26-e可以将分别S、PX1、PX2、F2与其他品种（系）区分开，G05-c可以将M与其他品种（系）区分开，pg29-a可以将XF与其他品种（系）区分开，G05-a+pg29-a可以将H与其他品种（系）区分开。

目录

声明

摘要

英文缩略表

第一章 引言

1．1 人参种质资源的研究现状

1．2 人参分子生物学研究进展

1．3 分子标记技术在人参种质资源研究中的进展

1．3．1 RAPD分子标记

1．3．2 AFLP分子标记

1．3．3 SSR分子标记

1．3．4 ISSR分子标记

1．3．5 SRAP分子标记

1．3．6 SNP分子标记

1．4 SSR分子标记的检测技术

1．4．1 琼脂糖凝胶电泳

1．4．2 聚丙烯酰胺凝胶电泳

1．4．3 毛细管电泳

1．5 目的及意义

第二章 人参SSR核心引物的筛选

2．1 试验材料

2．2 仪器和试剂

2．3 实验方法

2．3．1 DNA提取和检测

2．3．2 SSR反应体系

2．3．3 扩增产物的检测

2．3．4 数据统计和分析

2．4 结果与分析

2．4．1 引物的筛选

2．4．2 SSR核心引物信息分析

2．4．3 核心引物有效性的理论推测

2．4．4 核心引物的品种有效性验证

2．4．5 核心引物的毛细管电泳验证

2．5 小结与讨论

第三章 人参种质资源SSR分析

3．1 人参组织培养材料遗传稳定性分析

3．1．1 材料和方法

3．1．2 结果与分析

3．1．3 小结与讨论

3．2 15份人参种质资源遗传多样性分析

3．2．1 材料和方法

3．2．2 结果与分析

3．2．3 小结与讨论

3．3 不同人参品种(系)亲缘关系分析

3．3．2 结果与分析

3．3．3 小结与讨论

第四章 全文结论

参考文献

致谢

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