水牛抗日本血吸虫再感染和吡喹酮预防水牛感染日本血吸虫作用的研究

摘要

由血吸虫引起的血吸虫病是一种严重的人畜共患疾病。我国流行的是日本血吸虫病，它主要分布在长江中下游多沼泽湖泊地区。日本血吸虫病流行区域中的家畜尤其是水牛，对其流行与传播有着重要作用。水牛在感染日本血吸虫后不经治疗能够自我治愈。流行病学调查显示治疗后的水牛可能对再感染具有抗性。了解水牛抗血吸虫再感染抗性的程度、产生过程以及相关机理，可以为研制抗血吸虫疫苗、寻找治疗药物靶标、制定血吸虫防治对策提供科学依据。吡喹酮(PZQ)是治疗人畜血吸虫病的首选药物。由于吡喹酮在体内代谢快的特点，研究者们普遍认为吡喹酮不能产生长时间预防作用。对PZQ的应用和研究也都是针对PZQ对血吸虫虫体的直接作用而开展。本研究对水牛抗血吸虫再感染能力的产生过程、抗再感染程度以及所涉及到的免疫机制进行了研究，同时还观察到PZQ可以诱导水牛产生抗日本血吸虫感染的效果。
　　一、水牛抗日本血吸虫再感染程度及机制研究
　　本项研究共进行了两次独立试验。每次试验中将动物随机分成4组，其中第一组（组1）为首次再感染实验组，第二组（组2）为首次再感染的对照组，第三组（组3）为两次再感染实验组，第四组（组4）为两次再感染对照组。两次试验结果显示水牛对第二次再感染具有极强的抗性。两次试验中，组3和组4相比，减虫率分别达到98.0％和97.3％，虫体长度明显变短，肝脏和直肠中的虫卵减少率为91.1％-100％，肝脏病变减轻至几乎没有病变。两次试验中第一组收获的虫体数均显著多于第二组，主要原因是第一次试验中感染与PZQ处理的间隔时间太短(18d)而第二次试验中PZQ的质量问题导致治疗不彻底。因此，本研究所获得的结果难以说明水牛是否对首次再感染的具有抗性。我们对第一次试验中各组外周血清中与免疫调节相关的细胞因子IL-4、IL-5、IL-7、IL-10、IFN-γ和特异性抗体IgG、IgG1进行了动态监测，结果显示在再感染后的大多数采样时点，第一组和第三组均高于其各自对照组。
　　二、PZQ预防水牛感染日本血吸虫的效果观察
　　本项研究共进行了两次试验观察。两次试验所用PZQ均为原药粉剂，其中第一次试验所用PZQ购自南京制药厂，第二次所用PZQ购自江苏钦强兽药公司（试验结束后用高效液相分析，其PZQ纯度为自南京制药厂PZQ粉剂的20％）。第一次试验的两个实验组D18和D34分别为水牛抗日本血吸虫再感染研究的两个对照组，分别在感染前19d和18d、35d和34d进行连续两日预服PZQ(25mg/Kg，最大剂量10g)，第二次试验的实验组D8在感染前9d和8d预服PZQ(实际有效剂量为5mg/Kg)。空白对照组不用PZQ处理。在第一次试验中，D18组和空白对照组相比，虫体发育率减少了91.1％，D34组则没有减少。D18组和D34组相比获得94.6％的减虫率，95.7％的肝脏虫卵减少率和97.9％的直肠虫卵减少率。在第二次实验中，D8组和空白对照组相比，获得的减虫率为31％，肝脏虫卵减少率为100％，但没有观察到直肠虫卵减少率。同时，形态学观察发现，收获的成熟虫体显著变短(D18组和D34组比，D8组和空白对照组比)。我们也对两次试验中不同时间点外周血血清中的细胞因子(IL-4、IL-5、IL-7、IL-10、IFN-γ)和抗体（IgG）水平进行了检测。结果显示，水牛在口服PZQ之后的8到18天（感染前）以及感染血吸虫后的早期（28天），体内抗体和细胞因子含量高于对照组。研究结果首次发现水牛提前口服PZQ至少可以诱导18天的有效预防日本血吸虫感染，这对在日本血吸虫病流行季节提前给药预防水牛感染血吸虫具有很好的指导意义。
　　总结全文，本研究论文首次发现水牛经过两次感染治疗可以有效预防再感染，以及水牛提前口服PZQ至少在18天内可以有效预防日本血吸虫感染。

目录

声明

摘要

英文缩略表

第一章 引言

1．1 血吸虫病概述

1．2 水牛在日本血吸虫病传播过程中的地位

1．2．1 水牛感染血吸虫后具有自愈能力

1．2．2 水牛感染日本血吸虫后自愈机制研究进展

1．3 吡喹酮对日本血吸虫的治疗及预防作用

1．3．1 吡喹酮的治疗作用

1．3．2 吡喹酮的预防作用

1．4 本研究的目的

第二章 水牛抗日本血吸虫再感染程度及机制研究

2．1 引言

2．2 试验材料

2．2．1 生物材料

2．2．2 主要仪器及设备

2．2．3 主要试剂

2．2．4 主要试剂配制

2．3 试验方法

2．3．1 可溶性成虫抗原(SWA)的制备

2．3．2 试验安排

2．3．6 外周血血清中IL-4、IL-5、IL-7、IL-10和IFN-γ含量差异分析

2．3．7 ELISA法测水牛血清中各抗体水平

2．3．8 统计学分析

2．4 试验结果

2．4．1 水牛虫体负荷数情况

2．4．2 虫体长度测量结果

2．4．3 水牛肝脏、直肠中虫卵情况

2．4．4 水牛肝脏病理病变观蔡

2．4．5 外周血清中细胞因子含量结果

2．4．6 水牛外周血清中抗体水平测定

2．5 讨论

第三章 PZQ预防水牛感染日本血吸虫的效果观察

3．1 引言

3．2 试验材料

3．2．1 生物材料

3．2．2 主要仪器及试剂

3．3 试验方法

3．3．1 试验安排

3．3．2 血清收集

3．3．3 扫描电镜观察虫体超微结构

3．3．4 其他试验方法

3．4 试验结果

3．4．1 虫体回收情况

3．4．2 虫体长度测量结果

3．4．3 水牛肝脏与直肠中虫卵情况

3．4．4 水牛肝脏病理病变观察

3．4．5 日本血吸虫成虫超微结构观察

3．4．6 外周血血清中细胞因子和抗体含量检测

3．5 讨论

第四章 全文结论

参考文献

致谢

作者简历