主要蔬菜链格孢病原菌的鉴定与新病害研究

摘要

在世界范围内，链格孢属（Alternaria）真菌是引起蔬菜发病的主要病原菌，特别是其中的大孢子种，可引起严重的蔬菜黑斑病，造成巨大的经济损失。目前链格孢属的鉴定研究还不完善。本研究主要对我国链格孢属引起的蔬菜病害的发生情况进行调查与标本采集，通过产孢表型观察及分子生物学手段，对分离得到的各病害的致病菌进行了鉴定，并完善了链格孢属真菌的鉴定方法，为今后相关真菌分类及病害鉴定奠定基础。主要研究成果如下:
　　1.初步明确了我国部分省份链格孢属蔬菜病害的病原菌种类。2015至2017年，通过对天津、山东、内蒙古、北京、河北、甘肃、新疆及河南8个省15个地区进行病害调查，共采集到链格孢属蔬菜病害标本700余份，共分离获得链格孢属菌株219株，其中小孢子种78株，大孢子种141株。鉴定出链格孢属7个种，分别为芸薹生链格孢(A.brassicicola)、芸薹链格孢(A.brassicae)、细极链格孢(A.tenuissima)、链格孢(A.alternata)、茄链格孢(A.solani)、万寿菊链格孢(A.tagetica)和胡萝卜链格孢（A.dauci）。本研究对发生严重的病害田间症状及病原菌进行了详细的描述。
　　2.优化了传统形态学鉴定链格孢属真菌培养产孢表型的方法，并验证了适用于链格孢属蔬菜病害病原鉴定的6个基因。产孢表型培养方法优化为:菌落长至含PCA培养皿3/4时，刮去表面菌丝，以刺激产孢，后将产孢培养物涂抹至滤纸中央小孔周围，获得产孢表型。借鉴国外用于链格孢属分类研究ITS、GAPDH、RPB2、endoPG、Alta1、TEF1、TEF2、OPA2-1、OPA10-2、OPA1-3、ATPase和CAL共12个基因，筛选出可用于链格孢属蔬菜病害病原鉴定ITS、GAPDH、RPB2、TEF1、endoPG和Alta1共6个基因。
　　3.发现我国蔬菜新记录寄主病害三种。分别是由茄链格孢（Alternaria solani）与芸薹链格孢(A.brassicae)引起的莴笋叶斑病，由万寿菊链格孢(A.tagetica)和芸薹链格孢（A.brassicae）引起的生菜根腐病，由链格孢(A.alternata)引起的秋葵叶斑病，经鉴定均属国内新记录寄主病害。

目录

声明

摘要

第一章 链格孢属蔬菜病害病原鉴定研究进展

1．1 链格孢属真菌引起的蔬菜病害种类及危害程度

1．2 链格孢属真菌分类鉴定研究进展

1．2．1 形态学方法鉴定研究进展

1．2．2 分子生物学方法鉴定研究进展

1．3 研究目的及意义

1．4 技术路线

第二章 蔬菜上链格孢属病原菌形态学初步鉴定

2．1 试验材料

2．1．1 病害调查与标本采集

2．1．2 试验试剂

2．2 试验方法

2．2．1 病原菌分离

2．2．2 病原菌纯化

2．2．3 菌株保存

2．3 结果与分析

2．3．1 病原菌分离及初步鉴定结果

2．3．2 本章小结

第三章 链格孢属形态学与分子生物学鉴定方法的验证

3．1 试验材料

3．1．1 主要试验仪器

3．1．2 主要试验材料

3．2 试验方法

3．2．1 产孢标准培养

3．2．2 诱导产孢

3．2．3 培养产孢表型

3．2．4 致病性测定方法

3．2．5 分子生物学鉴定方法

3．3 结果与分析

3．3．1 产孢表型形态学鉴定方法优化结果

3．3．2 分子生物学鉴定方法验证结果

3．3．3 本章小结

第四章 我国蔬菜链格孢属新记录寄主病害及部分重要蔬菜病害的病原鉴定

4．1 试验材料与方法

4．1．1 病害调查和病原菌分离纯化

4．1．2 病原菌形态学鉴定

4．1．3 分离菌株致病力测定

4．1．4 多基因序列分析病原菌

4．2 结果与分析

4．2．1 莴笋链格孢叶斑病病原鉴定

4．2．2 生菜链格孢根腐病病原鉴定

4．2．3 秋葵链格孢叶斑病病原鉴定

4．2．4 西兰花黑斑病病原鉴定

4．2．5 白菜黑斑病病原鉴定

4．2．6 本章小结

5．1 结论

5．1．1 链格孢属蔬菜病害调查及初步鉴定

5．1．2 优化了链格孢属产孢表型培养观察方法

5．1．3 验证了适用于链格孢属分子生物学鉴定的基因

5．1．4 鉴定我国蔬菜新记录寄主病害三种

5．2 讨论

5．2．1 链格孢属真菌形态学分类方法仍需完善

5．2．2 多基因序列分析与形态学分类相结合是鉴定链格孢属真菌的趋势

5．2．3 由链格孢属引起的蔬菜病害在种水平上分类较复杂

参考文献

附录

致谢

作者简历