青花菜、花椰菜离体再生体系及青花菜雄核发育体系的建立

摘要

第一部分：分析评价了影响青花菜、花椰菜高效再生体系建立的诸多影响因子，其中包括：外植体的基因型，外植体的类型，苗龄，生长调节剂的种类、浓度、配比，硝酸银浓度，培养基的有机成分对再生芽数量和质量的影响；并研究了再生植株生根所需要的条件。结果表明：适合青花菜芽再生的分化培养基是mMS(MS大量元素+PG-96有机成分)+0.5mgl-1NAA+3.0mgl-1BA+4.0mgl-1AgNO3+3％蔗糖，在该培养基上，品种碧杉子叶再生芽分化率最高，达到4.1个/外植体；生根培养基为：MS+0.2mgl-1NAA+2％蔗糖。适合花椰菜芽再生的分化培养基是mMS(MS大量元素+PG-96有机成分)+0.5mgl-1NAA+3.0mgl-1BA+0.25mgl-1TDZ+2.0mgl-1AgNO3+3％蔗糖，在该培养基上，品种赛雪下胚轴再生芽分化率最高，达到18.1个/外植体；生根培养基为：MS+0.4mgl-1IBA+2％蔗糖。目前，试验中共得到500株以上表型正常的再生苗。利用RAPD技术，从分子水平检测再生植株遗传稳定性。在青花菜材料上所使用的62条随机引物中有20条在青花菜材料上可以得到扩增产物；在花椰菜材料上所使用的40条随机引物中有15条得到扩增产物。在青花菜材料上共检测了79个位点，未发现品种内出现体细胞无性系变异；在花椰菜材料上共检测了75个位点，也未发现品种内出现体细胞无性系变异。从而证明所获得的高效再生体系在遗传上是稳定的，可以用于下一步遗传转化工作。 第二部分：选用六个F1青花菜进行花药培养和游离小孢子培养，对影响其培养效果的若干因素进行比较研究。花药培养试验中，供试的六份材料全部得到花粉愈伤组织；游离小孢子培养试验中，供试的六份材料有四份得到胚状体。试验结果表明：基因型是影响雄核发育的关键因素。小孢子处于单核晚期至双核早期有利于花粉愈伤组织和胚状体的形成。4℃低温预处理4天以及32.5℃热激24小时有利于花粉愈伤组织的产生和胚状体的形成。花药培养最佳培养密度为每培养皿接种30个花药；花粉培养最佳培养密度4×105个小孢子/ml。在花药和花粉诱导培养中，PG-96培养基培养效果优于NLN培养基。在基因型一定的情况下，生长调节剂的种类和浓度决定小孢子向花粉愈伤组织方向发展还是向花粉胚方向发展。低浓度BA有利于小孢子成胚，而高浓度2，4-D有利于小孢子形成花粉愈伤组织。培养初期，培养基中添加10％的蔗糖有利于花药培养；添加13％的蔗糖有利于游离小孢子培养。目前为止，我们通过花药培养和花粉培养，获得了70株花粉植株。染色体记数表明，所得花粉植株包括二倍体、单倍体和混倍体。其中一半左右为双单倍体。

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文摘

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第一部分：青花菜及花椰菜体细胞高效再生体系的建立

第二部分：青花菜雄核发育的初步研究

参考文献

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