小鼠桑椹胚的程序化冷冻及玻璃化冷冻-管内解冻

摘要

本研究以小鼠桑椹胚为材料，研究了胚胎的程序化冷冻以及玻璃化冷冻-管内解冻。程序化冷冻实验：摸索适合小鼠桑椹胚的冷冻液和冷冻降温程序。选取种抗冻剂(乙二醇、DMSO、甘油)配制4种浓度为10％(v/v)的冷冻液，采用4种冷冻程序对小鼠的胚胎进行冷冻保存，观察不同的抗冻保护剂和冷冻程序对冷冻效果的影响。结果显示：采用10％的乙二醇作为冷冻溶液，以程序1冷冻的小鼠桑椹胚解冻后体外囊胚发育率和孵化率与对照组(新鲜胚胎体外培养)间差异不显著(95.4％vs100％和67.8％vs76.2％)(P＞0.05)；程序3用于小鼠桑椹胚的冷冻效果好，胚胎体外发育情况与对照组无差异(93.3％vs100％and73.3％vs76.2％)(P＞0.05)。结论：体积分数为10％的乙二醇和程序1、程序3是适合小鼠桑椹胚冷冻的冷冻液和冷冻程序。 玻璃化冷冻-管内接实验：研究不同的冷冻液和管内解冻时间对玻璃化冷冻胚胎解冻后存活率的影响，为大家畜冷冻胚胎的移植提供参数。实验方法：利用胚胎冷冻时在管内吸入的解冻液(0.5mol/L蔗糖溶液)稀释玻璃化冷冻溶液(Ethyleneglycol+Ficoll70+Sucrose，EFS30和EFS40)进行管内解冻。分别在解冻后3min、5min、8min、12min、16min和20min回收胚胎进行体外培养或直接移植给受体，观察胚胎的体内外发育情况。实验结果：以EFS30冷冻保存的胚胎解冻后体外培养结果表明，3～16min组胚胎的囊胚发育率和孵化率与对照组(新鲜胚胎体外培养)相比差异不显著(92.3％～98.4vs％100％，64.1％～75.6％vs76.2％，P＞0.05)；以EFS40冷冻保存的胚胎解冻后体外培养结果表明，3～20min组胚胎的囊胚发育率与对照组相比差异不显著(94.2％～100％vs100％，P＞0.05)，3～8min组胚胎的孵化率与对照组差异不显著(66.2％～72.9％vs76.2％，P＞0.05)。将EFS30冷冻-管内解冻后保持5min的168枚胚胎和168枚新鲜胚胎分别移植给假孕受体，妊娠受体产活仔率二者相比无显著性差异(58.3％vs.54.9％，P＞0.05)。结论：管内解冻时使用EFS30比EFS40效果好，可以在较长时间(3～16min)不影响胚胎存活率和孵化率，且胚胎移植后的产仔率与鲜胚组无显著性差异。为此推断本方法能够应用于大家畜的胚胎移植，同时建议EFS30冷冻的胚胎移植操作应当在16min内完成。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：略语表

独创性声明及关于论文使用授权的说明

第一部分文献综述——胚胎的玻璃化冷冻及其推广应用

第二部分研究论文

第三部分结论与展望

参考文献

感谢

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