利用多重PCR技术进行小麦高分子量麦谷蛋白亚基分子标记辅助选择

摘要

小麦的加工品质与小麦麦谷蛋白的组成和含量密切相关，特别是与由Glu-1位点编码的 HMW-GS的组成和含量。其中，1Ax2<'*>、1Axl、1Bx17+lBy18、1Bx14+lBy15、1Bx7+1By8、 1Bx7<'OE>(over-expression)和1Dx5+1Dy10亚基与好的加工品质相关，而1AxN、1Bx6、1Bx20和1Dx2+lDy12亚基与较差的加工品质相关。为了改良小麦品质，以上亚基特别是x-型亚基的特异的分子标记已经被建立并应用于品质改良的分子育种。基于传统的鉴定HMW-GS的SDS-PAGE方法和新近发展起来的基于DNA的PCR分析的等位基因特异的分子标记，我们建立了一次反应能够同时鉴定多个HMW-GS的多重PCR的体系。我们以1Ax2<'*>+1Bx7<'OE>+1Dx5的亚基组合摸索了PCR反应组分和循环参数对多重PCR反应结果的影响，其中引物浓度比例和Tm值是关键因素。然后，我们对不同的HMW-GS组合进行多重PCR扩增，总共得到了5种二重PCR组合：1Ax2<'*>+1Dx5、1Bx14+lDx5、1Ax1+lDx5、IBx7+1Dx5和1Ax2<'*>+1Bx7，6种三重PCR组合：1Ax2<'*>+1Bx7+1Dx5、1Ax1+1Bx7+1Dx5、 1Axl+1Bx17+1Dx5、1Ax1+IBx14+1Dx5、1Ax2*+1Bx14+1Dx5和1Ax2*+1Bx7<'OE>+1Dx5。这些不同的HMW-GS的多重PCR体系的建立可以快速高效的鉴定多个HMW-GS，可以用来进行复合分子标记辅助选择。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

第二章实验材料和方法

2.1实验材料

2.2实验方法

第三章实验结果及分析

3.1 SDS-PAGE分析已知亚基组成的小麦品种的HMW-GS组成

3.2单一PCR及分子标记特异性检测

3.3多重PCR体系的优化及不同组合的多重PCR体系的建立

3.3.1以1AX2*+1BX7OE+1DX5的多重PCR为例对多重PCR反应的条件进行优化

3.3.2不同亚基的不同组合的多重PCR

第四章讨论

参考文献

致谢

附录