胚胎附植相关因子在母猪妊娠早期的表达及其对产仔数的影响

摘要

本论文根据已知的人和小鼠Integrin αVβ3基因cDNA序列的保守区域设计了四对引物，扩增得到了Intern αV亚基的部分外显子5、外显子6～29和部分外显子30，长度为2508 bp，编码835个氨基酸；Integrin β3亚基的外显子3、外显子4～8和大部分外显子9，以及外显子15的中间部分，长度分别为1035 bp和1059 bp，编码344个氨基酸。序列比对发现，两个亚基的cDNA和氨基酸序列都与人和小鼠对应序列有较高的同源性。 通过RT-PCR和免疫组化方法对母猪妊娠第12、18和25天Integrin αV和β3亚基在子宫内膜中的mRNA和蛋白表达研究发现，胚胎附植的不同阶段Intern αV和β3亚基在子宫内膜中的表达都存在明显差异，mRNA与蛋白表达的趋势一致，都是在胚胎附植中期(妊娠第18天)的表达量最高。说明其在母猪妊娠早期，即胚胎的黏附和附植过程中有重要作用。免疫组化结果显示：Integrin αV在子宫内膜腺体上皮、腔上皮、间质细胞、基质细胞和血管内皮细胞等细胞上都有免疫阳性反应，在胚胎着床的不同时期具有明显变化，妊娠第18天表达较强。Integrin β3的免疫阳性反应与IntegrinαV基本一致，但是，不如Integrin αV的表达变化明显。实验还发现Integrin αV和β3在位于子宫内膜腔上皮下面的基质中有较强的表达，同样在妊娠第18天表达最强。说明猪的子宫内膜基质具有类蜕膜化的反应，只是与人和其他哺乳动物相比，其蜕膜化的程度相对较弱而已。 对受精配种后母猪血液FSH、LH、E<,2>和P<,4>水平检测发现，相对于未妊娠时期，在妊娠前25天内FSH和LH的水平都有所下降，但妊娠第12～25天内变化不显著(p>0.05)。在妊娠第12～25天期间P<,4>的水平变化也不是很大，然而，E<,2>的水平以及E2:P4的比值却明显增加。子宫内膜中Integrin αV和β3 mRNA的表达与血液中LH、FSH、E<,2>和P<,4>的水平都呈现负相关，但相关性都不显著性(p>0.05)。表明，Intern αV和β3的表达不受生殖激素影响，或影响很小。 利用PCR-SSCP方法对Integrin β3、LIF和IL-1β基因多态性与大白猪产仔数之间的关系进行了研究，结果发现Integrin β3对产仔数影响不显著(p>0.05)。对LIF基因研究表明，三胎以上LJF1位点优势等位基因对TNB和NBA的加性效应分别为0.28和0.32；而LIF2位点优势基因的加性效应分别为0.29和0.11。两个位点合并分析结果表明，在三胎以上或所有胎次，合并基因型AAAA、ABBB 和BBBB 的TNB 和NBA 都显著高于 AAAB、AABB 和 ABAB 基因型。其中，AAAA基因型母猪的所有胎次的TNB和NBA都要比AAAB型母猪分别高1.76(p<0.001)和1.44头(p<0.01)。总之，LIF基因对母猪的产仔数有显著影响。对IL-1β基因研究发现，分别在310 bp和347 bp处各发现一个突变位点，其中310 bp处的突变对产仔数的影响较大。其AB基因型个体的第2胎和第3～8胎的NBA均显著高于BB型个体(p<0.05)。对310 bp和347 bp两个位点合并分析发现，ABCC的TNB显著高于其他三种(ABDD、BBCC、BBDD)合并基因型(p<0.05)。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词

声明

第一章文献综述

第二章Integrin αVβ3基因部分序列的克隆与分析

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

2结果分析

2.1总RNA提取结果

2.2Integrin αVβ3基因cDNA序列扩增结果

2.3Integrin αVβ3部分cDNA及对应氨基酸序列与人和小鼠序列的同源性比较

3小结

第三章母猪妊娠早期Integrin αVβ3在子宫内膜的表达研究

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

2结果分析

2.1总RNA提取纯化结果

2.2妊娠早期子宫内膜Integrin αVβ3基因mRNA的表达水平

2.3妊娠早期子宫内膜Integrin αVβ3基因的免疫组化结果

2.4胚胎着床期血液激素水平的变化

2.5胚胎着床期Integrin αVβ3 mRNA表达量与激素水平之间的相关性分析

3讨论

3.1关于妊娠早期Integrin αV和β3在子宫内膜的表达

3.2Integrin αV和β3在子宫内膜的表达与血液激素的关系

第四章Integrin β3、LIF和IL-1β基因多态性与母猪产仔数关系的研究

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

2结果分析

2.1猪基因组提取结果

2.2 Integrin β3多态性检测及其与产仔数的关系

2.3 LIF基因多态性检测及其与产仔数的关系

2.4 IL-1β基因多态性检测及其与产仔数的关系

3讨论

3.1 Integrin β3基因多态性与产仔数关系

3.2 LIF基因多态性与产仔数关系

3.3 IL-1β基因多态性与产仔数关系

3.4关于候选基因对产仔数的影响

第五章结论

参考文献

致 谢

作者简历