减毒鼠伤寒沙门氏菌介导的斯氏艾美耳球虫DNA疫苗研究

摘要

兔球虫病是由艾美耳科的球虫引起的一种寄生性原虫病，随着规模养兔的迅速发展，该病对我国养兔业的危害日益严重。目前，报道的感染家兔的艾美耳属球虫有15个种，其中斯氏艾美耳球虫(Eimeria stiedai，Es)的致病力最强、危害最大，它寄生于兔的肝胆管上皮细胞，能引起严重的肝球虫病。尽管化学药物是目前控制兔球虫病的常用手段，但随着耐药虫株的不断出现和化学药物残留问题的日益凸现，越来越多的学者寻求用免疫学方法来防控该病。本研究应用无球虫兔和单卵囊分离技术进行了Es LZ株的分离，运用RT-PCR技术成功扩增出Es LZ株微线蛋白5(MIC-5)基因，并进行了原核表达和纯化；克隆了兔IL-15基因；以含有双启动子的pBudCE4.1为载体，构建了真核表达质粒pBMIC-5-IL-15，通过脂质体转染BHK-21细胞，证实该真核表达质粒能正确表达重组蛋白Es MIC-5和IL-15。在上述研究的基础上，根据载体.宿主平衡致死系统的原理，将asd基因引入真核表达质粒pBMIC-5-IL-15中，相继电转化asd基因缺陷型减毒鼠伤寒沙门氏菌X3730和X4550，从而构建了pBMIC-5-IL-15-asd载体-沙门氏菌平衡致死系统。遗传稳定性试验表明，该载体能稳定存在于减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550中。用携带重组质粒pBMIC-5-IL-15-asd的减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550在无球虫兔上进行了免疫试验。结果表明，重组菌X4550/pBMIC-5-IL-15-asd能诱导机体产生较高水平的抗球虫细胞免疫应答和体液免疫应答，有较好的免疫保护作用。以上试验为兔肝球虫病口服疫苗的研制奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词

声明

前 言

第一篇文献综述

第一章兔球虫病研究进展

第二章白细胞介素15的结构、功能及免疫佐剂活性

第三章减毒沙门氏菌作为疫苗活载体的研究进展

第二篇研究内容

第一章斯氏艾美尔球虫单卵囊的分离及孢子生殖过程

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

第二章斯氏艾美耳球虫LZ株MIC-5基因的克隆、序列分析及其表达研究

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

第三章兔白介素-15基因的克隆及其序列分析

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

第四章重组表达载体pBud-MIC5-IL-15的构建及其在真核细胞中的表达

1材料与方法

2结果

3讨论

4 小结

第五章重组表达载体pBud-MIC5-IL-15-asd的构建及转化减毒鼠伤寒沙门氏菌

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

第六章减毒鼠伤寒沙门氏菌介导的DNA疫苗免疫效果研究

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

第七章结论

致谢

参考文献

个人简历及攻读博士学位期间发表的研究论文

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