台湾进口甲鱼蛋的检疫及风险评估

摘要

甲鱼是一种具有很高的营养价值和药用价值的水产品，大陆用于种苗孵化的甲鱼蛋主要来自台湾。现阶段国内关于甲鱼蛋携带病原菌的普查较少，进口甲鱼蛋中检出霍乱弧菌的报道时有发生，台湾也发生过食用甲鱼蛋引起食物中毒事件。因此，本研究借助基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（Matrix assisted laser desorption/ionization time of flight massspectrometry，MALDI-TOF-MS），辅以VITEK2 Compact全自动生化鉴定仪、血清学方法和PCR技术，对台湾进口甲鱼蛋携带的病原菌进行普查，并建立了台湾进口甲鱼蛋中主要病原菌的MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱数据库。建立了大肠杆菌、沙门氏菌、弗氏柠檬酸杆菌和霍乱弧菌纳米金PCR检测方法，根据质检总局发布的《进境动物和动物产品风险分析管理规定》，对台湾进口甲鱼蛋进行定性风险评估。本实验结果如下: 1、利用MALDI-TOF-MS对73批台湾进口甲鱼蛋中分离到的细菌进行鉴定，结果显示此次分离到了25个属51种257株细菌，甲鱼蛋带菌率为90.41％，多重带菌现象严重。MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱数据库中收录了32种162株病原菌。 2、建立了检测大肠杆菌、沙门氏菌、弗氏柠檬酸杆菌和霍乱弧菌的纳米金PCR方法，通过优化退火温度和引物浓度，获得了良好的特异性和灵敏度。 3、对台湾进口甲鱼蛋可能携带的细菌性病害进行了致病性分析，选取其中致病性较强的7种细菌（嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌、霍乱弧菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157、肺炎克雷伯氏菌和副溶血弧菌）进行定性风险评估。风险评估结果显示，风险为高等的细菌性病害是霍乱弧菌，其他均为中、低等，并根据风险评估结果提出了相应的风险管理措施。 综上所述，本研究利用MALDI-TOF-MS对台湾进口甲鱼蛋所携带病原菌进行了普查，建立了针对台湾进口甲鱼蛋的主要病原菌的MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱数据库，将纳米金PCR技术应用于大肠杆菌、沙门氏菌、弗氏柠檬酸杆菌和霍乱弧菌的检测，还对台湾进口甲鱼蛋携带的主要病原菌进行了风险评估。上述结果对降低台湾输大陆动物及动物产品的食源性疾病发生的风险，进一步加强海峡两岸甲鱼蛋的贸易往来有重要意义。

目录

声明

摘要

主要符号表

第1章 引言

1．1 甲鱼蛋概况

1．1．1 甲鱼蛋研究价值

1．1．2 甲鱼蛋携带病原菌概况

1．2 食源性病原菌检测技术研究进展

1．2．1 传统方法

1．2．2 免疫学方法

1．2．3 分子生物学方法

1．2．4 蛋白质指纹图谱分析方法

1．2．5 其他方法

1．3 MALDI-TOF-MS在食源性病原菌鉴定中的应用

1．3．1 MALDI-TOF-MS的原理

1．3．2 MALDI-TOF-MS在病原菌检测中的应用

1．3．3 MALDI-TOF-MS应用中存在问题和展望

1．4 动物及动物产品风险评估

1．4．1 动物及动物产品风险评估基本概念

1．4．2 动物及动物产品风险评估需考虑因素

1．4．3 动物及动物产品风险评估现状

1．5 研究目的、意义及内容

1．5．1 研究目的、意义

1．5．2 研究内容

第2章 台湾进口甲鱼蛋中细菌的分离、鉴定及蛋白质指纹图谱数据库的建立

2．1 材料和方法

2．1．1 材料

2．1．2 方法

2．2 结果和分析

2．2．1 细菌鉴定结果

2．2．2 蛋白质指纹图谱数据库的构建

2．3 讨论

第3章 部分病原菌纳米金PCR检测方法的建立

3．1 材料和方法

3．1．1 材料

3．1．2 方法

3．2 结果和分析

3．2．1 纳米金PCR检测方法的建立

3．2．2 灵敏度检测及与普通PCR对比

3．2．3 特异性检测

3．2．4 甲鱼蛋中分离到细菌的检测

3．3 讨论

第4章 台湾进口甲鱼蛋携带主要病原菌的风险评估

4．1 危害因素确定

4．2 风险评估

4．2．1 嗜水气单胞菌风险评估

4．2．2 迟缓爱德华氏菌风险评估

4．2．3 大肠杆菌O157风险评估

4．2．4 沙门氏菌风险评估

4．2．5 霍乱弧菌风险评估

4．2．6 肺炎克雷伯氏菌风险评估

4．2．7 副溶血弧菌风险评估

4．3 风险管理措旋

4．4 结论

第5章 结论

致谢

参考文献

在学期间发表的学术论文