氯唑沙宗在SD大鼠体内的代谢及药动学相互作用研究

摘要

氯唑沙宗(chlorzoxazone)的化学名为5-氯-2-苯并恶唑酮(5-chloro-2-Hydroxy-benzoxazole)，是一种口服中枢性肌肉松弛剂，作用快且持久，可有效缓解各种急慢性扭伤、挫伤、肌肉劳损等引起的软组织疼痛以及中枢神经引起的肌肉痉挛疼痛。氯唑沙宗作用于脊髓反射中枢，能够阻断连接知觉神经和运动神经的介在神经元。由于多突触反射的抑制，使反射兴奋低下而缓解骨骼肌紧张。另外氯唑沙宗常常用于评价肝脏微粒体细胞色素CYP2E1酶活性，作为其唯一的特异性探针底物，氯唑沙宗在人体内主要经羟基化代谢为6-羟基氯唑沙宗，根据6-羟基氯唑沙宗与氯唑沙宗的血药浓度比值或尿中6-羟基氯唑沙宗的回收率可反应CYP2E1的酶活性。 实验第一部分通过采用HPLC-PDA-ESI-ITMSn联用技术，分离并鉴定出SD大鼠口服氯唑沙宗原料药后，尿液中的5种氯唑沙宗代谢产物，分别为6-羟基氯唑沙宗、6-羟基氯唑沙宗葡萄糖醛酸轭合物、6-羟基氯唑沙宗硫酸酯轭合物、氯唑沙宗葡萄糖醛酸轭合物和氯唑沙宗硫酸酯轭合物，同时揭示了这5种代谢产物的质谱裂解规律。实验发现6-羟基氯唑沙宗葡萄糖醛酸轭合物和6-羟基氯唑沙宗硫酸酯轭合物为主要代谢产物，可以经过水解酶的作用得到6-羟基氯唑沙宗，所以实验第二部分设计了一套方案，获取6-羟基氯唑沙宗葡萄糖醛酸轭合物和6-羟基氯唑沙宗硫酸酯轭合物这两个目标代谢产物。 实验第二部分我们通过给SD大鼠灌胃一定剂量的氯唑沙宗原料药后，收集其尿液。采用上样过D-101大孔树脂方法去除尿液中的部分杂质，得到一系列洗脱流份。与此同时结合高效液相色谱仪的高效分离检测手段，检测样品，合并含有相同代谢产物的流份，得到一定纯度的代谢产物粗提物。然后采用半制备型高效液相色谱仪对已经得到的代谢产物粗提物进行分离制备，从而得到所需的目标代谢产物。最后对所制备得到的目标代谢产物进行含量纯度测定检验和质谱结构确证。 第三部分，我们考察了临床上常用复方氯唑沙宗片中的两主成分氯唑沙宗和对乙酰氨基酚在SD大鼠体内联合用药的药动学行为进行了初步探讨，为临床合理用药提供了指导。实验结果发现与单独用药相比，联合用药后，对乙酰氨基酚的达峰浓度显著降低、平均滞留时间有所增加。氯唑沙宗的半衰期有所增加。

目录

声明

摘要

前言

第一章 HPLC-PDA-ESI-ITMSn法鉴定氯唑沙宗在SD大鼠尿液中的代谢产物

1 试验目的

2 仪器和试药

2．1 分析仪器

2．2 药品和试剂

3 实验方法

3．1 实验动物

3．2 尿液样品的采集

4 分析方法

4．1 尿液预处理

4．2 色谱-质谱条件

5 结果结论

5．1 氯唑沙宗对照品ESI-MS分析

5．2 尿液中主要代谢产物的ESI-MS分析

6 讨论

第二章 氯唑沙宗在SD大鼠尿液中的代谢产物的制备

1 SD大鼠尿液中的代谢产物提纯方法

1．1 仪器与试剂

1．2 实验动物

1．3 药品配置

1．4 尿液采集

1．5 高效液相色谱法对洗脱馏分进行检测

1．6 大孔树脂上样洗脱方法及粗提物的制备

2 分离制备目标代谢产物成分及色谱条件优化

2．1 药品与试剂

2．2 仪器

2．3 半制备型高效液相色谱条件

2．4 分析型高效液相色谱条件

2．5 目标代谢产物的制备及HPLC纯度检验

3 讨论与小结

4 实验展望

第三章 复方氯唑沙宗片中两主成分在SD大鼠体内药动学相互作用

1 实验仪器

2 药品与试剂

3 实验方法

3．1 实验动物

3．2 动物实验口服药物的配制

4 分析方案

4．1 色谱条件

4．2 标准溶液的配制

4．3 血浆样品预处理

4．4 分析方法的专属性

4．5 SD大鼠血浆中氯唑沙宗和对乙酰氨基酚的标准曲线制备

4．6 分析方法的精密度和回收率考察

4．7 分析样品的稳定性

4．8 SD大鼠血浆样品稀释效应考察

5 给药方案和采血时间

6 色谱分析及实验的数据处理

7 实验结果

7．1 SD大鼠体内血药浓度-时间曲线数据

7．2 平均血药浓度-时间曲线

7．3 药代动力学参数

8 小结与讨论

参考文献

致谢

文献综述 LC-MSn联用技术在药物代谢产物鉴定中的应用

作者简历