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培養軟骨細胞を用いた再生組織形成に対する機械的振動の影響

机译:机械振动对使用培养细胞细胞再生组织形成的影响

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摘要

生体は,周囲から受ける力学的刺激に対して適応的に応答することが知られている.例えば,適度な運動が筋量や骨密度を上昇させることが一般的に知られている.この現象は,生体を構成する基本単位である細胞が力学的刺激を何らかの方法で感受し,環境に適応するために生化学的な応答を示しているために起きると考えられている.力学的刺激に対する細胞の応答に注目した先行研究の例として,骨基質の産生を担う骨芽細胞に12.5 Hz,0.5 G の鉛直方向正弦波の機械的振動を与えながら培養した結果,細胞増殖が促進され,細胞どうしが重なり合う重層化が起き,細胞数が有意に増加することが報告された.また,50 Hz,0.5 G の振動条件では,骨芽細胞の骨基質の産生量が増加したことが報告された.細胞が力学的刺激を感受するメカニズムにはいまだ不明な点が多いが,機械的振動によって骨芽細胞に生じた現象を軟骨細胞に応用することで,膝関節軟骨の再生医療に応用できる可能性がある.膝関節軟骨は,老化による摩耗や激しい運動などによって損傷が生じると,ほとhど自然治癒しないといわれている.関節の治療法の一つに人工関節への置換が挙げられるが,人工関節では激しい運動が制限され,そのうえ数十年の寿命があるため,若者の長期使用には不向きであるといわれている.そこで,近年の膝関節の治療においては,関節軟骨の再生医療が注目を浴びている.軟骨の再生医療の概要は,患者の軟骨組織を少量取り出し,それを体外で培養し人工的に軟骨組織化したものを患者の軟骨損傷部に適用するといったものである.軟骨は生体内で厚みを持った層構造をとっており,機能として関節部のクッション性や潤滑性を実現している.また軟骨細胞は,自身が産生した軟骨特有の基質であるⅡ 型コラーゲンやプロテオグリカンなどの組織に包まれて存在している(図1).この構造や機能を細胞培養によって生体外で再現するために,現段階では軟骨再生の場としてコラーゲンゲルなどの足場材料を用いたり,軟骨細胞と軟骨細胞から産生される軟骨基質からなる細胞シートを複数重ね合わせたりする方法をとる(図2).しかし,足場材料の用意や細胞シートどうしの接着には,手間?コストや時間がかかるため,再生医療の簡単化および普及には,これらの削減が望まれる.そこで,最も基本的な細胞培養の方法である平面培養において,培養時に機械的振動を与えることにより,軟骨細胞の増殖や軟骨成分の産生が有意に促進されれば,足場材料の作製や細胞シートを重ねることをせず,体外での3次元的な軟骨組織の再生をより短期間?低コストで行えることが期待される.具体的には,機械的振動によって軟骨細胞が重層化することで細胞数が増えたうえで,さらに基質産生が促進されれば,これらの相乗効果によって単層培養でも厚みのある組織を作製できることが期待される.本研究では,足場材料を用いない平面培養時において軟骨細胞の増殖および基質産生に対する機械的振動の影響を検討することを目的とし,細胞数の測定,軟骨細胞シート作製および軟骨基質の染色による軟骨基質産生状態の観察を行った.
机译:在体内,它是已知的自适应地从周围环境接收机械刺激作出反应。例如,适度的运动是肌肉通常已知,以提高的量和骨密度。这种现象是一个modynamic系统,其是构成生物体的基本单位据认为,因为它听起来生化反应以某种方式刺激敏感和适应环境会发生有。如前述的一项研究集中于细胞对机械刺激的反应,12.5 Hz至负责骨基质产生成骨细胞的一个例子。细胞增殖被促进作为培养,同时给予的0.5g的垂直正弦波的机械振动的结果,和小区重叠据报道,noisylabization发生和细胞数目显著增加。此外,在50赫兹,0.5g的振动的条件下,成骨细胞骨据报道,该基板的制造量有所增加。还有在机制上还是许多未知的机制,细胞敏感的机械性刺激然而,通过应用在由机械振动,以成骨细胞的软骨细胞所产生的现象,它是适用于再生医学膝关节软骨这可能是可能的。膝关节软骨的老化磨损和剧烈运动等损坏有人说,它不愈合。虽然关节的治疗中的一个被替换为人工关节,激烈运动在人造关节据说,因为有多年生活的数量有限,它不适合长期使用年轻人。因此,近年来在治疗膝关节,再生医疗的关节软骨受到瞩目。软骨再生医学的概述是病人的软骨即使编织在少量去除,它是人工软骨组织的一个是人工软骨被施加到患者的软骨损伤。这是。软骨具有与体内厚度的层结构,并实现了关节的缓冲和润滑性作为函数正在做。软骨细胞也有一组II型胶原和蛋白聚糖,其是自身产生的基质特异性底物。它是由机织(图1)包围。为了通过细胞培养重现此结构和功能在体外,这是在目前阶段软使用脚手架材料,如胶原凝胶作为一个地方骨再生的,或来自软骨细胞和软骨细胞产生的基质软骨重叠的多个细胞片层的方法(图2)。然而,脚手架细胞片层的材料制备和相互作用由于需要麻烦或时间的磨损,这些减少所需的简洁性和再生医学的传播。那里在平面培养,最基本的细胞培养方法,通过在培养时给予机械振动,软骨细胞如果生产的生长和软骨组分被显著促进,这是不可能产生的支架材料和重复该细胞片,3据预计,二维软骨组织的再生可以的短时间内执行?具体地,通过机械振动如果软骨细胞增加了分层,这些协同效应进一步增强,如果基板生产被进一步促进。据预计,具有一定厚度的组织,即使在单层培养物来生产。在这项研究中,在平面文化的时间无脚手架材料为了考虑机械振动的生长和基板生产软骨细胞,测量,柔软性的细胞数目的影响由骨细胞片制备和软骨基质的染色的软骨基质产生条件观察。

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