柑橘木虱寄生真菌的筛选、鉴定及其生物学特性初步研究

摘要

柑橘黄龙病是柑橘生产史上最严重的病害之一，受感染病株一般只有5-8年寿命，表现出黄化、矮化、斑驳等症状，所结的果实苦涩，畸形，无售卖价值，而引起该病的韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacteriaasiaticus)至今无法人工培养，人们对黄龙病的病理学研究、抗病药剂及抗病品种的筛选进展缓慢。柑橘木虱(Diaphorinacitri Kuw.)是柑橘黄龙病的传播媒介。它取食黄龙病株后可终生带毒，且传毒率高。如果田间没有木虱，则即使有黄龙病株，黄龙病也不蔓延。而目前柑橘木虱防治方法主要还是采用化学防治，为此带来了农药残留、环境污染等一系列问题，因此筛选柑橘木虱寄生真菌有其必要性。本文于柑橘木虱死虫及其发生地的土壤微生物中分离得到4株柑橘木虱较高毒力病原真菌FJAT-9620、FJAT-9622、FJAT-9719、FJAT-9720，通过16s rDNA鉴定3株为球孢白僵菌，一株为蜡蚧轮枝菌。对4株病原真菌的生物学特性进行的研究，结果表明，在PDA、PPDA、SDAY三种培养基上培养，4株真菌的生长速率最慢的是SDAY，而在PDA、PPDA上的生长速率不存在明显差异;而在三种培养基上产孢量，FJAT-9622在PDA上产孢量最大，其余菌株均在PPDA上产孢量最大;而孢子萌发率均是PPDA培养基上的最高。采用三种酶的诱导培养基培养4株菌，测定了4株菌的胞外蛋白酶，胞外几丁质酶和胞外脂肪酶的含量，并分析了三种酶与校正死亡来之间的关系，结果表明，菌株FJAT-9620、FJAT-9622、FJAT-9719、FJAT-9720胞外蛋白酶含量分别为18.3U/mL、28.0U/mL、37.1U/mL、21.1 U/mL，胞外几丁质酶含量为3.0U/mL、12.8 U/mL、20.5 U/mL、1.0U/mL，胞外脂肪酶含量分别为6.3 U/mL、5.9U/mL、5.3U/mL、5.4U/mL;其中，校正死亡率与胞外蛋白酶间呈直线相关：Y=2.436X-2.560(相关系数r=0.96，P=0.0001)，说明4株菌株胞外蛋白酶活性与对柑橘木虱问呈正相关，相关性极显著;校正死亡率与胞外几丁质酶间呈直线相关：Y=2.184X+41.141(相关系数r=0.91，P=0.0001)说明4株菌株胞外几丁质酶活性与对柑橘木虱间呈正相关，相关性极显著;校正死亡率与胞外脂肪酶问线性方程：Y=.15.096X+148.12(相关系数r=0.44，P=0.148>0.05)，说明胞外脂肪酶与校正死亡率间不存在相关性。