稻瘟病菌中一个编码剪切因子的致病新基因的功能研究

摘要

本文旨在研究从稻瘟病菌中分离了一个新的致病基因，并明确其在前体转录本剪切过程中行使的功能。从稻瘟病菌的REMI突变体库中筛选到一个产孢量显著减少、菌落生长缓慢的突变体MS3514，并通过遗传共分离分析确认该突变体的表型变异与潮霉素抗性标记共分离。质粒拯救和基因互补实验确定，MS3514的表型变异是由于潮霉素抗性标记基因插入破坏了MGG 11708.6的表达引起的(命名为PCGI)。进一步基因敲除实验表明，pcg1敲除体几乎不产生分生孢子，菌落生长速度极显著地变慢，营养菌丝的细胞间隔明显的变短，并完全丧失了对寄主的致病性。Pcg1是一个功能性的核蛋白。并进行敲除体互补的实验证明coiled-coil区域的缺失使Pcgl完全丧失功能，ER-rich区域的缺失能使pcgl敲除体的缺陷表型得到部分恢复。通过实验证明，部分基因转录本中内含子剪切效率的降低导致了pcgl敲除体的生物学表型缺陷。最后，序列比对分析显示Pcgl同源类似物在动物、植物和真菌中广泛分布，并在一级结构上具有一定的保守性。而且酵母双杂交结果表明Pcg1能替代hCCDC12与MoCwf4在人类细胞中的同源类似物hCRNL直接物理互作，反之亦然。