1型鸭疫里默氏杆菌patatin样磷脂酶基因的功能研究

摘要

为进一步了解鸭疫里默氏杆菌patatin样磷脂酶基因的功能，根据本实验室构建的RA1基因组表达文库及ivi基因筛选获得一长444 bp的Raplp部分序列，以改良的SiteFinding-PCR方法延伸序列，扩增获得了一长4662 bp的序列。生物信息学分析显示，Raplp基因的完整ORF为2061 bp,推导氨基酸为686 aa，与其它物种PLP氨基酸序列的相似性最高为23 %。本研究首次克隆获得并重组表达了R. anatipestifer的plp,重组表达产物rRaPLP具有磷脂酶A的水解活性，MAFP对rRaPLP的体外酶活性具有抑制作用。以同源重组的方法构建突变体RaΔplp::erm，对其生物学特性的研究发现突变体的毒力较亲本株有所下降，证实RaPLP是R.anatipestifer的潜在致病因子。