抗金黄色葡萄球菌毒力因子FnbpA和ClfA单链抗体的构建

摘要

奶牛乳腺炎是影响奶牛业发展,给乳品生产带来巨大损失的一种常见多发病.金黄色葡萄球菌是最重要的致病菌,但针对金黄色葡萄球菌的疫苗并不能对奶牛乳腺炎提供足够的保护,抗体治疗可能有一定的作用.本研究构建了针对金黄色葡萄球菌感染过程中最重要的毒力因子纤连蛋白结合蛋白(FnbpA)和凝集因子(ClfA)的单链抗体(scFv).首先从患金黄色葡萄球菌乳腺炎的奶牛外周血淋巴细胞中提取RNA作为模板扩增scFv的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),利用重叠延伸PCR将VH和VL通过linker-(Gly4Ser)3连接构建scFv;然后将scFv基因克隆入原核表达载体pOPE 101-XP后转化E.coli XLl-Blue进行诱导表达并提取周质腔可溶性蛋白;最后通过间接ELISA的方法筛选针对FnbpA和ClfA的scFv.最终我们获得了两株亲和力较高的阳性克隆scFvZW.28和scFvZW.132,分析这两株scFv的氨基酸序列发现,FR区氨基酸序列比较保守,CDR区氨基酸变异较大,尤其是VH的CDR3区.Western blot分析表明两株scFv能够与FnbpA和ClfA特异性结合.该研究为治疗奶牛乳腺炎抗体制剂的研发提供了新的思路.