鸡柔嫩艾美耳球虫AMA1蛋白在乳酸乳球菌中的表达

摘要

目的:探索鸡柔嫩艾美尔球虫(E.tenella)子孢子顶膜抗原AMA1胞外域基因(EtAMA1)是否可以在乳酸乳球菌L.lactis NZ9000中表达,为鸡球虫病乳酸菌口服免疫奠定基础.rn 方法：将鸡柔嫩艾美尔球虫子孢子顶膜抗原EtAMA1克隆入原核表达载体PET-30a(+)中构建重组阳性质粒pET-30a-EtAMA1。阳性质粒经鉴定正确后转化入大肠杆菌E.coli Rosseta中筛选阳性菌，阳性菌经1.0mmol/L IPTG诱导后采用Westernblot方法检测目的蛋白表达。rn 结果：EtAMA1在大肠杆菌中以包涵体形式表达。多克隆抗体效价为218，Westernblot检测证实制备的抗体可与子孢子反应。重组菌pTX8048-EtAMA1/L.lactis NZ9000经nisin诱导后，采用Westernblot方法检测到约61kDa目的融合蛋白表达。rn 结论:顶膜抗原AMA1在顶复门寄生虫中保守。研究表明，AMA1蛋白在顶复门寄生虫入侵宿主细胞过程中具有重要作用。在顶复门虫体入侵宿主细胞过程中，AMA1参与了运动连接（MJ）的形成，MJ结构模式代表了顶复门寄生虫保守的入侵机制。