家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法及诊断试剂盒

摘要

基于为蚕种生产与流通贸易提供快速、灵敏、准确检测家蚕微孢子虫方法的目的，以家蚕微孢子虫小亚单位核糖体RNA基因66 bp片段作为靶标，设计特异性PCR引物和TaqMan探针，构建重组质粒制备标准品，进行荧光定量PCR扩增，通过优化PCR反应体系，测定线性范围，评价方法的特异性、灵敏度和重复性，成功构建、研制了家蚕微孢子虫的荧光定量PCR检测方法和诊断试剂。该方法的检测线性范围为1×108-1×102拷贝mL-1的7个线性梯度，检测敏感度达1×102mL-1家蚕微孢子虫，特异性高，3次重复性检测应用试验的批内变异系数为3.6％～7.2％，批间变异系数为5.2％～7.8％。结果表明，建立的家蚕微孢子虫荧光定量PCR方法具有准确、灵敏、快速、特异性强的特点。