猪链球菌谷氨酸脱氢酶的原核表达、纯化及其免疫保护性

摘要

目的：原核表达、纯化猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH)，并检测其免疫原性和免疫保护性。方法：应用PCR方法扩增gdh的完整ORF，按正确的阅读框架将其克隆入原核表达载体pET-30a，构建pET-30a-gdh表达质粒，转化E.coli BL21(DE3)，筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达，表达的rGDH经亲和层析纯化后免疫家兔，ELISA法检测家兔血清中抗rGDH抗体效价，Western blot检测rGDH免疫原性，并用活菌攻毒，计算家兔的保护率。结果：构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达，Ni+NTA柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;纯化的rGDH免疫家兔后获得高效价的抗GDH抗体，被检菌株与抗GDH血清反应均有单一特异性反应条带，5份实验感染猪血清均能与rGDH产生反应条带，且免疫家兔可获得50％的保护率。结论：成功原核表达并纯化了猪链球菌谷氨酸脱氢酶，重组蛋白免疫原性良好，并能够为家兔提供一定的免疫保护。