土鳖虫胰酶酶解物抗凝活性部位分离纯化及组成分析

摘要

目的:采用溶剂萃取和凝胶柱色谱法对土鳖虫胰酶解物进行分离纯化，初步确定其抗凝活性部位及化学成分组成。rn 方法:应用胰酶酶解法制备土鳖虫胰酶酶解物，以APTT 凝血时间为指标，采用溶剂萃取法，获得抗凝活性部位IV，经凝胶柱色谱法对其进行进一步分离纯化获得胰酶酶解纯化物，采用考马斯亮蓝法对其进行定量，通过MALDI-TOF-MS 法检测分离部分的分子量分布范围。rn 结果:土鳖虫胰酶酶解物部位IV 有较强的抗凝活性，其抗凝活性强度与浓度相关；部位IV 经Sephadex G-25 纯化后考马斯亮蓝法测得其蛋白含量为 5.5%；进一步用Sephadex G-10 脱盐的纯化物，采用MALDI-TOF-MS 检测确定为分子量在 850～910Da 间的3 组多肽混合物。rn 结论:体外抗凝实验表明，凝胶柱色谱法分离纯化土鳖虫胰酶酶解物方法可行，抗凝活性组分为小于1000Da的小分子肽类。