双向位点特异性PCR技术在金银花混杂品鉴定中的应用

摘要

中药材混杂品鉴定一直是中药鉴定中的难点问题,本研究在筛选获得金银花真伪鉴别SNP位点的基础上,建立双向位点特异性PCR方法,用于鉴别金银花和其常用伪品以及两者的混杂品.首先通过对GenBank收录的忍冬属植物叶绿体TmL-trnF序列进行对比分析,获得金银花真伪鉴别SNP位点；并依据该SNP位点设计特异性引物,对84份金银花基原植物及其市售饮片、伪品进行双向位点特异性PCR扩增,并根据真伪品的特异性条带进行金银花药材鉴别.结果表明,退火温度为61℃时,正品均出现468 bp的条带,红腺忍冬、华南忍冬、灰毡毛忍冬、黄褐毛忍冬、水忍冬、金银忍冬、郁香忍冬、新疆忍冬、繁果忍冬等9个伪品均出现324bp的条带,在正品DNA中掺入5％以上伪品时同时出现正品和伪品条带.