家禽市场环境中H5N1亚型禽流感病毒传播风险分析

摘要

目的:对长沙市家禽市场职业暴露人群进行H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)抗体水平和环境AIV核酸检测,并对环境中H5N1亚型AIV的血凝素(Hamagglutinin,HA)基因进行测序分析,探讨家禽市场环境中H5N1亚型AIV发生传播的风险.方法:抽取长沙市一个区和一个县,在各区、县中选择2个城区或乡镇家禽市场进行职业暴露人群H5N1抗体和环境AIV核酸检测.利用单放射免疫扩散溶血实验(SRH)对102份家禽市场职业暴露人员血清进行H5N1抗体检测,real-time PCR方法检测160份家禽市场环境标本(污水、禽类粪便、羽毛和禽类笼具表面涂抹标本)AIv核酸,收集4份污水H5N1亚型AIV核酸阳性标本进行HA基因RT-PCR扩增和TA克隆测序,测序结果利用Lasergene和Mega5软件进行氨基酸比对和进化树构建.结果:H5N1抗体监测结果显示家禽市场职业暴露人群血清H5N1抗体阳性率为25.5％ (26/102),其中乡镇和城区家禽市场职业暴露人群阳性率分别为50.0％ (9/18)和25.4％(17/67),乡镇家禽市场职业暴露人群H5N1抗体阳性率高于城区家禽市场.AIV核酸监测结果显示长沙市家禽市场环境中H5亚型AIV核酸阳性率为31.3％ (50/160),其中乡镇家禽市场阳性率为37.3％(31/83),高于城区家禽市场24.7％ (19/77)的阳性率；不同标本H5亚型AIV核酸阳性率不同,由高到低依次为污水(50.0％,24/48)、羽毛(44.5％,4/9)、禽类粪便(29.8％,14/47)和禽类笼具表面涂抹(14.3％,8/56),经统计学检验,差异均有统计学意义(P＜0.01).TA克隆测序得到4个H5N1亚型AIV HA基因序列,进化树显示本研究中的4个H5N1亚型AIV HA基因与中国内地和香港禽来源的AIV病毒分离株为同一分组,属于欧亚分支:4个H5N1亚型AIV HA基因受体结合位点氨基酸序列仍然为禽源(QSG)、HA1和HA2蛋白之间连接肽为多个碱性氨基酸序列(RERRRKK或RERRGKK),与人源H5N1亚型AIV具有相同的受体结合位点和高致病性的分子特征.结论:长沙市家禽市场环境中存在较多数量的H5N1亚型AIV是导致职业暴露人群H5N1抗体阳性率达25.5％的原因之一；环境中存在的H5N1亚型AIV HA基因表现出来的高致病性分子特征,增加了家禽市场环境中的H5N1亚型AIV发生传播的风险.