蝎毒镇痛活性肽BmK AngM1在毕赤酵母中的表达研究

摘要

目的：建立蝎毒镇痛活性肽BmK AngM1在毕赤酵母中的高水平表达系统。方法：根据BmK AngM1的cDNA序列,结合毕赤酵母的密码子偏爱性,合成BmK AngM1基因。将BmK AngM1基因克隆到表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母,甲醇诱导表达。通过Ni2+螯和层析和HPLC建立重组蛋白rBmK AngM1的纯化方法。通过小鼠扭体镇痛实验模型对rBmK AngM1进行药理活性评价。采用单因子和正交试验对毕赤酵母重组菌产生rBmK AngM1的发酵过程进行优化,确定最佳发酵条件,并将重组菌从摇瓶培养放大到15 L发酵罐培养。结果：rBmK AngM1具有显著的镇痛活性。通过发酵罐培养,rBmKAngM1在毕赤酵母中的表达量可达2.5g·L-1。结论：本研究为大规模发酵制备BmK AngM1奠定了基础,可更好地满足BmK AngM1的理论研究及新药开发的需要。